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- HL7037
- 2025年08月07日
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英文名称：
规格：25g
丙酮酸钠产品说明与用途：
丙酮酸钠使用操作规程：
目的：建立营养琼脂培养基配制使用操作规程。
范围：本操作规程适用于营养琼产品脂培养基的配制使用。
职责：质检室质检员负责本操作规程的执行，质保室质监员负责本操作规程的监督检查。
丙酮酸钠实验内容：
1．仪器与试剂：
1.1.托盘天平、消毒锅、电实验冰箱、1000ml三角瓶、500ml量筒、玻璃棒、棉塞、牛皮纸、线绳、培养皿。
1.2.蒸馏水、营养琼脂、75%酒精。
2.操作方法
2.1.称取营养琼脂17克，于1000ml三角瓶内，加入500ml纯化水，充分搅拌后，塞上棉塞，用牛皮纸包好，扎紧瓶口。
2.2.置消毒锅内，于115℃高压灭菌30分钟，取出放置至室温后，放入实验冰箱，备用（实验冰箱温度控制在1－4℃）。
2.3.使用时从实验冰箱取出，放置室温后，置水浴中加热，使融，全部融化后取出，放置约45℃时使用。
2.4.使用时，用75%乙醇擦瓶子外围，打开牛皮纸包扎外壳，在火焰附近慢慢旋下棉塞，左手拿培养皿，右手拿三角瓶，慢慢倾倒至培养皿中，每皿注入约
15ml完毕后，将棉塞在火焰上方烧烤数秒，立马塞入瓶口，包上牛皮纸外层，用线绳扎好，留下次使用。（此瓶培养基只允许使用两次，且每次首先倾注一个空白平皿作为对照培养）。
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文献和实验BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠）， 10% 马血清（热灭活）。传代： 吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加 2 - 3 毫升 Trypsin-EDTA，放在 37℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1：2 到 1：4 为宜，传代期间培养液 2 - 3 天
PHA＋200u/ml IL－2＋10g/L 谷氨酰胺＋100u/ml 青霉素＋100μg/ml 链霉素＋1mmol/L 丙酮酸钠。 2.饲养细胞培养 液：RPMI1640＋10％FCS＋10g/L 谷氨酰胺＋100u/ml 青霉素＋100μg/ml链霉素＋1mmol/L 丙酮酸钠。 3.NK 克隆 培养液：RPMI1640＋10％FCS＋10g/L 谷氨酰胺＋100u/ml 青霉素＋100μg/ml 链霉素＋1mmol/L 丙酮酸钠，经0．2u 滤板过滤再加入100u/ml IL－
制法 A液：布氏杆菌肉汤 970mL 无水磷酸氢二钠 1.18g 无水磷酸二氢钾 0.23g 琼脂 2g 加热溶解，高压灭菌，121℃ 15min。加入B液10%硫酸亚铁(含7H2O)，C液10%偏亚硫酸氢钠，D液10%丙酮酸钠。 上述B、C、D溶液均新鲜配制，用除菌滤膜过滤。将此除菌溶液各1mL混合后再入A液中，无菌调pH到7.3，无菌分装，每管3mL，塞紧备用
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