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- 2025年07月13日
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1000
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上海钰博
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- 细胞形态：
上皮样
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- 运输方式：
干冰运输
- 生长状态：
贴壁生长
DiO是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。进入细胞膜后，DiO在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。可以用标准的FITC滤光片检测。
DiO通常不会明显影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂（long-term tracer）。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
DiO (DiOC18(3)) 细胞膜绿色荧光探针产品性质
同义名（Synonym）
DiOC18(3); DiO perchlorate; 3,3-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate
CAS 号（CAS NO.）
34215-57-1
分子式（Molecular Fomular）
C53H85ClN2O6
分子量（Molecular Weight）
881.72
外观（Appearance）
橘色至红色固体
Ex/Em
484/501 nm
推荐滤光器（Filter）
XF23-Omega, 31001-Chroma
纯度（Purity）
＞97%
溶解性（Solubility）
溶于DMF，DMSO，甲醇
结构式（Structure）
DiO (DiOC18(3)) 细胞膜绿色荧光探针
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品-20 ºC干燥避光保存，有效期1年。
注意事项
1) 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 染色液制备
（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
【注】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
2. 悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
5. 流式细胞仪检测
经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。
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文献和实验光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光）。其中DiR的红外荧光可穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。 图3 DiI 标记的外泌体通过静脉注射观察在体内器官的分布情况 J Cereb Blood Flow Metab. 2018 May;38(5):767-779. 图4 DiO 标记的外泌体与 HCT116 细胞共孵育 BMC Cancer. 2018 Jan 6;18(1):47. 图5 DiR 标记的外泌体静脉注射小鼠结肠癌肿瘤模型 J
细胞膜染料+外泌体染料双染策略，彻底解决外泌体摄取实验中的假阳性问题
.1 （a）EvLINK 505 对外泌体的标记率与（b）化学模拟脱落的的EvLINK 505 结构对外泌体的标记率 不聚集、不弥散的“真实”染色 EvLINK 通过共价偶联外泌体膜而实现标记发光，避免了两大“假阳性”： 1）非亲脂性染料，无聚集趋势，避免了因染料聚集带来的假阳性； 2）不弥散，仅标记外泌体膜轮廓，不标记细胞膜，避免了染料弥散二次着色细胞膜带来的假阳性。Fig.2 为弥散性亲脂染料 DIO 标记的外泌体与非弥散性 EvLINK 505 标记的外泌
染料的浓度，引起假去极化。荧光探针JC-1是一种阳离子型的亲脂性染料，能够自由穿过细胞膜，随细胞膜电位的变化而在膜两侧保持动态平衡。其特点是线粒体膜电位低时浓度低，主要以单体形式存在，488nm激发时最大发射波长为527nm，呈绿色荧光，胞浆相对线粒体为低电位，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性；膜电位高时浓度高形成聚集体，488nm激发时的最大发射波长为590nm，红色荧光。活细胞线粒体膜电位高，线粒体内JC-1聚集体的浓度高，红色荧光很强，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性，而凋亡细胞则大多
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