Recombinant Pufferfish Leptin重

产品编号：xy- CYT-530
细胞名称：Recombinant Pufferfish Leptin重组河豚瘦素
规格：5×10⁵cells/瓶
产品说明书：咨询销售人员
细胞生长：贴壁生长
细胞形态：成纤维细胞样
细胞数量：1×106个细胞数
细胞传代：1:2 ~1:5传代；每周1~2次
细胞特性：该细胞老化前能传代42~46个倍增时间
细胞纯度：93％
细胞活力：87％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌产品注明
细胞冻存：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）
细胞运输：干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25 flasks）
细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗
我司提供的Recombinant Pufferfish Leptin重组河豚瘦素取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的Recombinant Pufferfish Leptin重组河豚瘦素完全培养基(CM-H001)能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，我司还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
购买细胞注意事项：
1.） 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.）仔细阅读细胞说明书，Recombinant Pufferfish Leptin重组河豚瘦素了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3.） 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4.） 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议直接购买培养基。
5.） 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。
6.） 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
Recombinant Pufferfish Leptin重组河豚瘦素操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育过夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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