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英文名称:
规格:10ml×4
萋-尼氏染色液产品说明与用途:用于细菌抗酸染色
萋-尼氏染色液使用操作规程:
目的:建立营养琼脂培养基配制使用操作规程。
范围:本操作规程适用于营养琼产品脂培养基的配制使用。
职责:质检室质检员负责本操作规程的执行,质保室质监员负责本操作规程的监督检查。
萋-尼氏染色液实验内容:
1.仪器与试剂:
1.1.托盘天平、消毒锅、电实验冰箱、1000ml三角瓶、500ml量筒、玻璃棒、棉塞、牛皮纸、线绳、培养皿。
1.2.蒸馏水、营养琼脂、75%酒精。
2.操作方法
2.1.称取营养琼脂17克,于1000ml三角瓶内,加入500ml纯化水,充分搅拌后,塞上棉塞,用牛皮纸包好,扎紧瓶口。
2.2.置消毒锅内,于115℃高压灭菌30分钟,取出放置至室温后,放入实验冰箱,备用(实验冰箱温度控制在1-4℃)。
2.3.使用时从实验冰箱取出,放置室温后,置水浴中加热,使融,全部融化后取出,放置约45℃时使用。
2.4.使用时,用75%乙醇擦瓶子外围,打开牛皮纸包扎外壳,在火焰附近慢慢旋下棉塞,左手拿培养皿,右手拿三角瓶,慢慢倾倒至培养皿中,每皿注入约
15ml完毕后,将棉塞在火焰上方烧烤数秒,立马塞入瓶口,包上牛皮纸外层,用线绳扎好,留下次使用。(此瓶培养基只允许使用两次,且每次首先倾注一个空白平皿作为对照培养)。
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文献和实验1、原理与应用 结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒精处理也不易脱色,经此染色后,结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色,而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。 2、材料 (1)结核病人痰 (2)抗酸染色液 (3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆。 3、方法 (1)取洁净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰,在清洁无油脂玻片上涂开。涂抹区约拇指盖大。用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌。 (2)涂片自然干燥后,用片夹挟住玻片一端
,至涂抹均匀部位基本没有红色再脱下为止,水洗。 (6)滴加吕氏美蓝染液30sec,水洗。 (7)吸干、镜检。 4、溶液配制 萋-尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液 (1)石炭酸复红液:硷性复红4g,溶于95%酒精100ml,作成饱和溶液,再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。 (2)3%盐酸酒精液。 浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。 (3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液
将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水, 使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。 ⑶ 脱色液:95%乙醇 ⑷ 复染液:沙黄2.5g,95%乙醇100ml为贮存液,取贮存液10ml,加蒸馏水90ml为应用液。 2.抗酸染色液 ⑴ 碱性复红染色液: ①萋纳石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱和溶液10ml,5%石炭
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