Antigen Retrieval Buffer (50×C

Antigen Retrieval Buffer (50×Citrate Sodium Buffer, pH 6.0) 柠檬酸钠抗原修复液（50×）产品描述

免疫染色实验，细胞或组织往往需要经多聚甲醛、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构，然而此步操作通常会封闭抗原决定簇，使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应，从而引起染色信号衰减，甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于：1）醛类固定剂导致组织上的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键，从而封闭抗原表位；2）醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联（cross-link），形成醛交联蛋白，导致抗原表位被封闭。因此，需要对固定组织进行抗原修复（antigen retrieval，AR）来逆转被掩盖的抗原表位，使其重新暴露出来，恢复抗原表位-抗体的结合能力，从而改善染色效果。

抗原修复的方法非常多，主要有热诱导的抗原修复（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）和酶诱导的抗原修复（Proteolytic Induced Epitope Retrieval），修复方法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步，抗原修复方法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液，从而达到最佳的修复效果。

本品为柠檬酸钠抗原修复缓冲液，pH 6.0，是一款非常经典且应用范围极其广泛的热修复缓冲液之一，适用于大多数的抗原。经此缓冲液修复后的染色信号明显得以增强，并且背景很低。本品特别适合用于石蜡切片，也可用于冰冻切片等其他样本。本品为50×浓缩的柠檬酸钠抗原修复液，使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。按照每个片子需10ml抗原修复液的量来计算，约可做500个样品。

Antigen Retrieval Buffer (50×Citrate Sodium Buffer, pH 6.0) 柠檬酸钠抗原修复液（50×）运输和保存方法

室温运输。4℃或-20℃保存。一年有效。

注意事项

1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2） 抗原修复通常用于醛类固定的石蜡切片，而冰冻切片由于组织比较脆弱，易在修复过程中被破坏掉，因此比较少进行抗原修复。然而醛类固定的冰冻切片同样会发生蛋白交联而封闭抗原表位，导致染色效果不佳。很多文献资料表明采用适当的方法进行冰冻切片抗原修复，也能显著改善染色效果。特别是当染色效果欠佳的前提下，可考虑进行冰冻切片的抗原修复。

3） 修复过程中一定要使用足量的修复液（1×）来完全浸没组织切片。

使用方法

1．Antigen Retrieval Buffer (50×Citrate Sodium Buffer, pH 6.0) 柠檬酸钠抗原修复液（50×）对于石蜡切片

1） 脱蜡：a）二甲苯中脱蜡3次，5min/次，期间更换新鲜二甲苯；b）无水乙醇脱水2次，5min/次；90%乙醇脱水2次，5min/次；70%乙醇脱水1次，5min/次；蒸馏水冲洗2次，5min/次；

2） 抗原修复：用高压蒸汽或者水浴锅预热装有柠檬酸钠修复液（1×）的容器内，使得溶液温度达到95~100℃。将切片浸于其中（一定要完全浸没），然后根据现有的实验条件选择合适的方法（高压热修复、微波热修复或沸水浴热修复）来进行95-100℃持续加热，时间约20~40min（最佳加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索）。

注：总的来说，高压热修复具有温度均一，节省时间，效果稳定等特点，其修复强度最大，是最常用的热修复法。微波修复法也比较常用，修复强度稍低于高压修复，但优于沸水浴修复强度。微波加热修复的过程中，需要避免暴沸和过多的水分蒸发。

3） 冷却：取出容器，室温冷却约20~30min。

4） 清洗：用PBST（1×）清洗切片1-2次，3-5min/次。之后进行封闭等后续的免疫染色步骤。

2. 对于冰冻切片

方法一：传统冰冻切片修复法

1） 清洗：用免疫染色的清洗液（如PBS、TBS等）清洗切片1~2次，各3~5min。

2） 抗原修复：用高压蒸汽或者水浴锅预热装有柠檬酸钠修复液（1×）的容器内，使得溶液温度达到95~100℃。将切片浸于其中（一定要完全浸没），然后根据现有的实验条件选择合适的方法（高压热修复、微波热修复或沸水浴热修复）来进行95-100℃持续加热，时间约10~30min（最佳加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索）。

注：总的来说，高压热修复具有温度均一，节省时间，效果稳定等特点，其修复强度最大，是最常用的热修复法。微波修复法也比较常用，修复强度稍低于高压修复，但优于沸水浴修复强度。微波加热修复的过程中，需要避免暴沸和过多的水分蒸发。

3） 冷却：取出容器，室温冷却约20~30min。

4） 清洗：用PBST（1×）清洗切片1-2次，3-5min/次。之后进行封闭等后续的免疫染色步骤。

Antigen Retrieval Buffer (50×Citrate Sodium Buffer, pH 6.0) 柠檬酸钠抗原修复液（50×）方法二：改进后的冰冻切片修复法

1） 固定：用4%多聚甲醛溶液固定组织，组织块大小需合适（约3~5mm厚）。

2） 修复：将组织充分浸入柠檬酸钠抗原修复液（1×）于4℃浸泡过夜。之后将组织放入小且耐热的小篮内并浸泡在已经预热到95-100℃的修复液内（约200~500ml），至于加热搅拌器上边慢速搅拌，持续加热3~5min。立即将组织块放入含有30%蔗糖的1×PBS中，置于4℃孵育直至被淹没。

3） 冰冻：将组织块浸入包埋介质内，并用碎干冰迅速冷冻。此时可将组织块放入-80℃保存。

4） 切片：用冰冻切片机进行切片，并固定到载玻片上。也可做漂片。之后进行封闭等后续的免疫染色步骤。

Antigen Retrieval Buffer (50×Citrate Sodium Buffer, pH 6.0) 柠檬酸钠抗原修复液（50×）yb-4865R BNP脑钠素/利钠肽抗体 浓度1mg/ml
yb-8726R BZW2BZW2蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8675R BDKRB1缓激肽B1受体抗体 浓度1mg/ml
yb-4775R BK channel钙激活钾通道蛋白α1抗体 浓度1mg/ml
yb-11041R Bestrophin 2卵黄状黄斑病蛋白2抗体 浓度1mg/ml
yb-7905R BRSK1丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SAD-B抗体 浓度1mg/ml
yb-7779R BRD7鼻咽癌相关转录调节蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-11989R Creatine kinase B type脑肌酸激酶BCK抗体 浓度1mg/ml
yb-7980R beta glucuronidaseβ葡萄糖醛酸苷酶抗体 浓度1mg/ml
yb-11462R BCAS1乳腺癌相关蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-7586R Bcl 2 like protein 9Bcl2样凋亡蛋白9抗体 浓度1mg/ml
yb-8398R BTBD10BTB/POZ结构域蛋白10抗体 浓度1mg/ml
yb-8400R BTBD17BTB/POZ结构域蛋白17抗体 浓度1mg/ml
yb-8401R BTBD19BTB/POZ结构域蛋白19抗体 浓度1mg/ml
yb-8436R BXDC2BXDC2蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8421R BOLA1BOLA1蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8422R BOLA2BOLA2蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8423R BPIL1杀菌通透性增加蛋白样1抗体 浓度1mg/ml
yb-8424R BPIL2杀菌/通透性增加蛋白样2抗体 浓度1mg/ml
yb-8432R BTNL3嗜乳脂蛋白样3抗体 浓度1mg/ml
yb-8425R BPIL3杀菌/通透性增加蛋白样3抗体 浓度1mg/ml
yb-8426R BRD1BRD1蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8429R BRPF3BRPF3蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8435R BXDC1BXDC1蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8427R BRP44脑蛋白44抗体 浓度1mg/ml
yb-8428R BRP44L脑蛋白44样蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8431R BTNL2嗜乳脂蛋白样2抗体 浓度1mg/ml
yb-8433R BTNL8嗜乳脂蛋白样8抗体 浓度1mg/ml
yb-8434R BTNL9嗜乳脂蛋白样9抗体 浓度1mg/ml