EDTA抗原修复液（50×）Antigen Retriev

EDTA抗原修复液（50×）Antigen Retrieval Buffer (50× EDTA Buffer, pH 8.0)产品描述

免疫染色实验，细胞或组织往往需要经多聚甲醛、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构，然而此步操作通常会封闭抗原决定簇，使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应，从而引起染色信号衰减，甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于：1）醛类固定剂导致组织上的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键，从而封闭抗原表位；2）醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联（cross-link），形成醛交联蛋白，导致抗原表位被封闭。因此，需要对固定组织进行抗原修复（antigen retrieval，AR）来逆转被掩盖的抗原表位，使其重新暴露出来，恢复抗原表位-抗体的结合能力，从而改善染色效果。

抗原修复的方法非常多，主要有热诱导的抗原修复（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）和酶诱导的抗原修复（Proteolytic Induced Epitope Retrieval），修复方法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步，抗原修复方法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液，从而达到最佳的修复效果。

本品为EDTA抗原修复缓冲液，pH8.0，是一款非常经典且应用广泛的热修复缓冲液之一，适用于大多数的抗原，经此缓冲液修复后的染色信号明显得以增强。本品特别适合用于石蜡切片，也可用于冰冻切片等其他样本。本品为50×浓缩的EDTA抗原修复液，使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。按照每个片子需10ml抗原修复液的量来计算，约可做500个样品。

EDTA抗原修复液（50×）Antigen Retrieval Buffer (50× EDTA Buffer, pH 8.0)运输和保存方法

室温运输。4℃或-20℃保存，一年有效。

注意事项

1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2） 抗原修复通常用于醛类固定的石蜡切片，而冰冻切片由于组织比较脆弱，易在修复过程中被破坏掉，因此比较少进行抗原修复。然而醛类固定的冰冻切片同样会发生蛋白交联而封闭抗原表位，导致染色效果不佳。很多文献资料表明采用适当的方法进行冰冻切片抗原修复，也能显著改善染色效果。特别是当染色效果欠佳的前提下，可考虑进行冰冻切片的抗原修复。

3） 修复过程中一定要使用足量的修复液（1×）来完全浸没组织切片。

4） 不同pH的修复液对修复效果的影响很明显，归于传统习惯使用柠檬酸钠修复液，pH6.0（货号：36305ES60）比较多。目前很多资料表明绝大多数抗原（抗体），使用高pH值（约8.0或9.0）的修复液能得到更好的染色效果。

EDTA抗原修复液（50×）Antigen Retrieval Buffer (50× EDTA Buffer, pH 8.0)使用方法

1． 对于石蜡切片

1） 脱蜡：a）二甲苯中脱蜡3次，5min/次，期间更换新鲜二甲苯；b）无水乙醇脱水2次，5min/次；90%乙醇脱水2次，5min/次；70%乙醇脱水1次，5min/次；蒸馏水冲洗2次，5min/次；

2） 抗原修复：用高压蒸汽或者水浴锅预热装有EDTA抗原修复缓冲液（1×）的容器内，使得溶液温度达到95~100℃。将切片浸于其中（一定要完全浸没），然后根据现有的实验条件选择合适的方法（高压热修复、微波热修复或沸水浴热修复）来进行95-100℃持续加热，时间约15min（加热时间控制在10~30min内，最佳加热时间需根据不同的样品和目的

蛋白自行摸索）。

注：总的来说，高压热修复具有温度均一、节省时间、效果稳定等特点，其修复强度最大，是最常用的热修复法。微波修复法也比较常用，修复强度稍低于高压修复，但优于沸水浴修复强度。微波加热修复的过程中，需要避免暴沸和过多的水分蒸发。

3） 冷却：取出容器，室温冷却约20~30min。

4） 清洗：用PBST（1×）清洗切片1-2次，3-5min/次。之后进行封闭等后续的免疫染色步骤。

2. EDTA抗原修复液（50×）Antigen Retrieval Buffer (50× EDTA Buffer, pH 8.0) 对于冰冻切片

1） 清洗：用PBST（1×）或者其他免疫染色用的清洗液如TBS、TBST等清洗切片1~2次，各3~5min。

2） 抗原修复：用高压蒸汽或者水浴锅预热装有EDTA抗原修复缓冲液（1×）的容器内，使得溶液温度达到95~100℃。将切片浸于其中（一定要完全浸没），然后根据现有的实验条件选择合适的方法（高压热修复、微波热修复或沸水浴热修复）来进行95-100℃持续加热，时间约15min（加热时间控制在10~20min内，最佳加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索）。

注：总的来说，高压热修复具有温度均一、节省时间、效果稳定等特点，其修复强度最大，是最常用的热修复法。微波修复法也比较常用，修复强度稍低于高压修复，但优于沸水浴修复强度。微波加热修复的过程中，需要避免暴沸和过多的水分蒸发。

3） 冷却：取出容器，室温冷却约20~30min。

4） 清洗：用PBST（1×）清洗切片1-2次，3-5min/次。之后进行封闭等后续的免疫染色步骤。
EDTA抗原修复液（50×）Antigen Retrieval Buffer (50× EDTA Buffer, pH 8.0)yb-11509R BBS7巴尔得-别德尔综合征相关蛋白7抗体 浓度1mg/ml
yb-11511R BBS9巴尔得-别德尔综合征相关蛋白9抗体 浓度1mg/ml
yb-11512R BBS10巴尔得-别德尔综合征相关蛋白10抗体 浓度1mg/ml
yb-6757R BCA2乳腺癌相关基因2抗体（锌指蛋白364） 浓度1mg/ml
yb-6646R BLKB淋巴细胞酪氨酸激酶抗体 浓度1mg/ml
yb-7514R BAI2脑特异性血管生成抑制蛋白2抗体 浓度1mg/ml
yb-5798R BNIP3L促凋亡BNIP3L蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-5799R BAG3Bcl2抑凋亡蛋白Bag3抗体 浓度1mg/ml
yb-5796R BCL2L10BCL2样10促凋亡蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-5797R BCL2L12BCL2样12含脯氨酸蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-5800R BAG5BCL2分子伴侣调节蛋白5抗体 浓度1mg/ml
yb-12900R BTF3转录因子BTF3抗体 浓度1mg/ml
yb-6682R BNIP2Bcl2相互作用蛋白2抗体 浓度1mg/ml
yb-5928R BASC4乳腺癌扩增序列蛋白4抗体 浓度1mg/ml
yb-6258R Phospho-Bcr (Tyr360)磷酸化T淋巴细胞受体抗体 浓度1mg/ml
yb-9292R BNC1碱性核蛋白1/锌指蛋白basonuclin抗体 浓度1mg/ml
yb-6508R BCMP11乳腺癌膜蛋白11抗体（前梯度同源蛋白2） 浓度1mg/ml
ybm-4579M BNP(H1G3)人脑钠素单克隆抗体 浓度1mg/ml
yb-3850R BCMAB淋巴细胞成熟因子抗体 浓度1mg/ml
yb-3784R Bik促凋亡Bik蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-5994R BCSC1乳腺癌抑癌蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-4291R BARD1乳腺癌易感基因环状结构域蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-5992R BRCAA1乳腺癌相关抗原BRCAA1抗体 浓度1mg/ml
yb-5993R Bex1脑组织表达X连锁蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-2748R BLNKB淋巴细胞连接蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-3054R Phospho-BLNK (Tyr96)磷酸化T淋巴细胞连接蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-2747R BcrBcr抗体 浓度1mg/ml
yb-3051R Phospho-BAP1 (Ser592)磷酸化乳腺癌易感基因1抗体 浓度1mg/ml