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上海信裕
1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液,10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶(预热20分钟左右)2ml消化,轻轻摇晃,Recombinant Mouse Bax GST Tag细胞凋亡基因直至肉眼见单层细胞呈块状脱落(或在显微镜下观察细胞之间分离),立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化,轻柔吹打8-10次成单细胞。
3.离心1000rpm*5min,弃上清,加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中,每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液,正常情况下2-3天就可以长满,期间不用换液。
Recombinant Mouse Bax GST Tag细胞凋亡基因的传代方法:首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%,不需要长满,就准备传代。倒掉旧的培养基,再用已经高压灭菌过的PBS洗1-2次,我用的是25平方厘米的培养瓶,加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤,再用一次性过滤器过滤除菌,Recombinant Mouse Bax GST Tag细胞凋亡基因再分装成1ml的小包装,刚好每次用完一个,避免每次反复冻存,会使胰酶的活性下降),加入的量以刚好盖满瓶底为宜。放到倒置显微镜下观察变化,一旦发现细胞开始变园收缩,大约1-3分钟时间,必要时可以吹打帮助细胞分散,就立即加入培养基中和胰酶,如有EDTA最好要离心(800rpm,5min),弃上清夜,Recombinant Mouse Bax GST Tag细胞凋亡基因再加入完全培养基吹匀,再分瓶,一般一瓶可以分2-3瓶。放入5%的CO2培养箱,37度培养24小时后观察。
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文献和实验Preparation of Recombinant Protein Spotted Arrays for Proteome‐Wide Identification of Kinase Targets
) GST‐3C (prepared in‐house) or PreScission 3C protease (GE Healthcare Life Sciences, cat. no. 27‐0843‐01) Histone H1 (Sigma
蛋白抗体将目的蛋白沉淀下来?如果能直接用目的蛋白的抗体,那正是我所期望的,试验简单啊。回答:1、做Co-IP时是否选用Tag的抗体不是主要的,重要的是你用的抗体是否可以做IP以及IP的效果如何。所以说,如果你目标蛋白的抗体可以用于IP,且效 果好,就不需要顾及Tag的问题。单就Co-IP或IP而言,goat抗体最好,mouse次之,rabbit不是太好,这里好坏的重要标准之一是 Western blot时重轻链信号的干扰问题.2、抗体能用就不需要标签。3、这个没有标准答案,只有做了才知道。理论上都是可行
祝贺〖雅裕睿安〗成为Signalway Antibody(SAB)独家
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