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- 2025年07月16日
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上海信裕
1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液，10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶（预热20分钟左右）2ml消化，轻轻摇晃，Recombinant Human Heat Shock Protein 20热休克蛋白直至肉眼见单层细胞呈块状脱落（或在显微镜下观察细胞之间分离），立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化，轻柔吹打8-10次成单细胞。
3.离心1000rpm*5min,弃上清，加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中，每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液，正常情况下2-3天就可以长满，期间不用换液。
Recombinant Human Heat Shock Protein 20热休克蛋白的传代方法：首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%，不需要长满，就准备传代。倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，我用的是25平方厘米的培养瓶，加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶－0.02%EDTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤，再用一次性过滤器过滤除菌，Recombinant Human Heat Shock Protein 20热休克蛋白再分装成1ml的小包装，刚好每次用完一个，避免每次反复冻存，会使胰酶的活性下降），加入的量以刚好盖满瓶底为宜。放到倒置显微镜下观察变化，一旦发现细胞开始变园收缩，大约1－3分钟时间，必要时可以吹打帮助细胞分散，就立即加入培养基中和胰酶，如有EDTA最好要离心（800rpm,5min)，弃上清夜，Recombinant Human Heat Shock Protein 20热休克蛋白再加入完全培养基吹匀，再分瓶，一般一瓶可以分2－3瓶。放入5%的CO2培养箱，37度培养24小时后观察。
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文献和实验指将生物的整体、组织、细胞等从其生活的温度范围内急剧地从低温移向高温时，可显著地促进合成的一组蛋白质。例如将果蝇的幼虫或培养细胞从28℃移至 35℃时，则几乎大部分的蛋白质合成停止；与此相反，而休克蛋白的合成却反而被促进。这种促进作用主要是在转录 DNA的合成（转录）阶段产生的。同样的现象也见于哺乳类动物、培养细胞、原生动物、植物组织和细菌等。另外观察到，由休克以外的其他处理也会发生类似的现象。这种现象的生理意义尚不清楚，但推测是与生物的温度适应现象有关系。
Isolation of Heat Shock Protein Complexes
Heat shock proteins (Hsp) are molecular chaperones with the capability to interact with a wide range of other proteins and are thus often found coupled with other heat shock and non-heat shock proteins. This can be an advantage to study
Molecular chaperones or heat-shock proteins (HSPs) are protein machines that interact with unfolded or partially folded polypeptides and assist them in attaining their proper conformation. The folding reaction relies on a complex array
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