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上海信裕
1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液,10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶(预热20分钟左右)2ml消化,轻轻摇晃,Filamin细丝蛋白直至肉眼见单层细胞呈块状脱落(或在显微镜下观察细胞之间分离),立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化,轻柔吹打8-10次成单细胞。
3.离心1000rpm*5min,弃上清,加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中,每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液,正常情况下2-3天就可以长满,期间不用换液。
Filamin细丝蛋白的传代方法:首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%,不需要长满,就准备传代。倒掉旧的培养基,再用已经高压灭菌过的PBS洗1-2次,我用的是25平方厘米的培养瓶,加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤,再用一次性过滤器过滤除菌,Filamin细丝蛋白再分装成1ml的小包装,刚好每次用完一个,避免每次反复冻存,会使胰酶的活性下降),加入的量以刚好盖满瓶底为宜。放到倒置显微镜下观察变化,一旦发现细胞开始变园收缩,大约1-3分钟时间,必要时可以吹打帮助细胞分散,就立即加入培养基中和胰酶,如有EDTA最好要离心(800rpm,5min),弃上清夜,Filamin细丝蛋白再加入完全培养基吹匀,再分瓶,一般一瓶可以分2-3瓶。放入5%的CO2培养箱,37度培养24小时后观察。
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文献和实验应力纤维又叫张力纤维,是真核细胞中广泛存在的一种较为稳定的束状纤维结构, 与骨骼肌中肌原纤维非常相像。应力纤维由大量平行排列的肌动蛋白组成,此外还含有其他在肌细胞鉴定过的蛋白质, 包括肌球蛋白Ⅱ、原肌球蛋白、α-辅肌动蛋白和细丝蛋白(filamin), 这些蛋白在肌动蛋白纤维上呈非连续排列, 但肌动蛋白纤维是连续的, 并成双向定向。 应力纤维具有收缩功能。它在细胞的形态发生、细胞分化和组织形成中具有重要作用。由整联蛋白介导的细胞外基质同细胞内的连接也是通过应力
与长春花碱( vinblastine)、泛洛洛新及泛洛洗汀等一起含在蔓长春花( Vinca major)中的生物碱。具有使细胞分裂(有丝分裂)在中期停止的作用,这与秋水仙素相似,但其作用比秋水仙素更强。与秋水仙素一样可以与微管蛋白结合而抑制其生物活性,但结合部位不同。另外它与秋水仙素不同的是对微管蛋白以外的蛋白质如肌动蛋白及 10纳米细丝蛋白等也起作用。在临床医学上作为抗癌剂之一而被应用,特别是对造血器官的肿瘤比较有效。
整合素家族白细胞黏附受体组 ( β 2 组 ) β2亚单位为CDl8,分子质量为95kDa。CDl8可分别与CDlla-c(αL、αM和αX)亚单位和αD亚单位组成不同的整合素二聚体LFA-1(αLp2,CDlla/CDl8)、Mac-1(αM日2,CDllb/CDl8)、p150,95(αXβ2,CDllc/CDl8)和αDβ2。CDl8表达于所有的白细胞。CDl8胞质区可与多种细胞骨架蛋白相互作用,如。辅肌动蛋白和细丝蛋白以及胞质调节分子
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