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上海信裕
BRDU 5-溴-2-脱氧尿苷计数：培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，BRDU 5-溴-2-脱氧尿苷所以要进行细胞计数，计数结果以每毫升细胞数表示，细胞计数的原理和方法怀与血细胞计数相同，血细胞计数器；手工计数细胞，COUI TER计数仪；人工计数。
1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液，10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶（预热20分钟左右）2ml消化，轻轻摇晃，BRDU 5-溴-2-脱氧尿苷直至肉眼见单层细胞呈块状脱落（或在显微镜下观察细胞之间分离），立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化，轻柔吹打8-10次成单细胞。
3.离心1000rpm*5min,弃上清，加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中，每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液，正常情况下2-3天就可以长满，期间不用换液。
BRDU 5-溴-2-脱氧尿苷的传代方法：首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%，不需要长满，就准备传代。倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，我用的是25平方厘米的培养瓶，加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶－0.02%EDTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤，再用一次性过滤器过滤除菌，BRDU 5-溴-2-脱氧尿苷再分装成1ml的小包装，刚好每次用完一个，避免每次反复冻存，会使胰酶的活性下降），加入的量以刚好盖满瓶底为宜。放到倒置显微镜下观察变化，一旦发现细胞开始变园收缩，大约1－3分钟时间，必要时可以吹打帮助细胞分散，就立即加入培养基中和胰酶，如有EDTA最好要离心（800rpm,5min)，弃上清夜，BRDU 5-溴-2-脱氧尿苷再加入完全培养基吹匀，再分瓶，一般一瓶可以分2－3瓶。放入5%的CO2培养箱，37度培养24小时后观察。
xy-1195 L6565(小鼠L6565白血病克隆细胞系). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
xy-1196 F9(畸胎瘤细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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xy-1230 COS-1(SV40 转化的非洲绿猴肾细胞 ). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液，10mLPBS洗一遍
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3.离心1000rpm*5min,弃上清，加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中，每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液，正常情况下2-3天就可以长满，期间不用换液。
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xy-1195 L6565(小鼠L6565白血病克隆细胞系). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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文献和实验相关实验
5-溴尿嘧啶 5－ bromouracil 系尿嘧啶 5位的氢为溴所代换的人工碱基相似体。在生物体内有与胸腺嘧啶相似的活动作用，一般作为一种追踪物质而被利用．可被 DNA包围．但由于这里所聚合的核酸密度大，所以用超离心沉淀已成为可能。另外由于这种核酸光感性变大，因此可应用于细胞选择性破坏和人工突变的诱发。
以5-氟尿嘧啶为碱基而形成的脱氧核苷。是具有代表性的代谢颉颃物质，具有很强的抑制增殖细胞作用。在生物体内经胸腺嘧啶核苷激酶（thyimidi-ne kinase）的作用，变成氟脱氧尿嘧啶核苷酸，这种酸可颉颃地抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，认为这是切断了作为DNA合成前体物质的胸腺嘧啶脱氧核苷酸的供给所致。
实验材料 Materials Required But Not Provided 1. BrdU reagent (Invitrogen Cat. No. 00-0103) 2. Cytospin Tubes 3. Phosphate-Buffered Saline 4. 0.22 micron filter 实验步骤 1. Labeling with BrdU In Vivo
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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