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㊣Annexin Ⅴ凋亡检测试剂盒
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发育凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin Ⅴ是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin Ⅴ被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发育凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化。因为细胞坏死时也会发生膜磷脂酰丝氨酸外翻，所以Annexin Ⅴ常与鉴定细胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。
公司拥有Annexin Ⅴ的专利权，可提供各种规格的Annexin Ⅴ凋亡检测试剂。其中Annexin ⅤFITC试剂盒中包含FITC标记的Annexin Ⅴ及PI，此凋亡试剂盒质优价廉，且有小包装，适于检测小样本的客户；
以Annexin Ⅴ FITC试剂盒为例进行以下说明：
Annexin V-EGFP Reagent (1000 assays)试剂盒组份：
● FITC标记的Annexin Ⅴ
● PI染料（20ug/ml）
● 结合缓冲液
注意事项：
● 保证细胞的状态，避免出现过多的死亡细胞
● 操作过程避免过度用力，以免出现机械性细胞死亡
● 使用去离子水准备所需溶液
● 2-4℃避光保存试剂盒
● 使用一次性吸头，避免出现交叉污染
Annexin V-EGFP Reagent (1000 assays)基本操作
● 按照既定程序诱导细胞凋亡
● 按照说明书配制所需容溶液
● 讲细胞悬浮在1×结合缓冲液中，浓度调整为2-5×10５/ml
● 将细胞悬浮液和FITC标记Annexin Ⅴ混合，温室孵育10分钟
● 离心，PBS洗涤细胞；使用1×结合缓冲液重悬细胞
● 使用PI染色细胞（终浓度为1ug/ml）
● 使用流式细胞仪分析
Annexin V-EGFP Reagent (1000 assays)
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文献和实验Buffer 含有 Ca2+，主要是促进Annexin V 与 PS 的结合。不加 Binding Buffer，会导致 Annexin V 的结合能力降低，造成阳性信号大幅下降甚至无阳性信号。 Q：如何设置补偿管？ A：实验设计时，考虑到补偿，建议设置全单染管调节补偿，如果样本有明显的自发荧光，且自发荧光对选择的染料有干扰，则必需设置一管只有自发荧光的细胞管(对于表达荧光蛋白的细胞，不加任何试剂的空白对照组作为EGFP的单阳组；对于有荧光的药物，细胞只加药物处理，作为药物的单阳组)，用来调节补偿
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中（图3）。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（propidine iodide, PI）是一种核酸
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