- ￥2000
- bersee®博尔西
- 中国
- BTR204Q-5Y
- 2026年02月24日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
20%乙醇4-8℃保存
- 保质期：
3年
- 英文名：
ProteinAG Berpharose FF
- 库存：
大量
- 供应商：
北京博尔西科技有限公司
- 规格：
5ml预装柱
提示：本店全部产品均为科研、实验专用试剂，非药品、非食品、非体外诊断试剂，不可用于动物及人体！
蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF
（Protein AG-Berpharose FF）
蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF 是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。同单独的蛋白A 或蛋白G分离介质相比，具有更宽广的结合范围，同时融合后的r-PAG 降低了对pH值的依赖，允许在pH5-8进行结合。本产品多用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究，及抗体固定及其它相关研究。
1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、25ml、100ml、500ml
3.产品性能
| 性能 | 指标 |
| 基质 | 4%琼脂糖微球 |
| 配基 | 蛋白A蛋白G融合蛋白 |
| 配基密度 | >4mg/ml |
| 载量 | ≥20mg人IgG /ml |
| 粒径 | 45-165μm |
| *大耐压 | 0.3Mpa |
| 流速 | 50-300 cm/h |
| pH稳定范围 | 3-10 |
| 储存缓冲液 | 20%乙醇 |
| 储存温度 | 4-8℃ |
4. IgG与蛋白AG结合强度比较
| 种类 | 亚类 | 蛋白A | 蛋白G | 蛋白A蛋白G融合蛋白 |
| 人 | IgG1 | +++ | +++ | +++ |
| IgG2 | +++ | +++ | +++ | |
| IgG3 | + | +++ | +++ | |
| IgG4 | +++ | +++ | +++ | |
| IgM | + | - | + | |
| IgD | - | - | - | |
| IgA | + | - | + | |
| Fab | + | + | + | |
| 兔 | IgG | +++ | ++ | +++ |
| 山羊 | IgG1 | + | +++ | +++ |
| IgG2 | +++ | +++ | +++ | |
| 牛 | IgG1 | + | +++ | +++ |
| IgG2 | +++ | +++ | +++ | |
| 小鼠 | IgG1 | + | +++ | ++ |
| IgG2a | +++ | +++ | +++ | |
| IgG2b | +++ | +++ | +++ | |
| IgG3 | ++ | +++ | +++ | |
| IgM | - | - | - | |
| 大鼠 | IgG1 | + | ++ | ++ |
| IgG2a | - | +++ | +++ | |
| IgG2b | - | + | + | |
| IgG2c | +++ | +++ | +++ | |
| 猪 | IgG | +++ | ++ | +++ |
| 犬 | IgG | +++ | + | +++ |
| 鸡 | IgY | - | - | - |
| 马 | IgG（ab） | + | ++ | + |
| IgG（c） | + | ++ | + |
5.纯化流程
以免疫共沉淀（Co-IP）举例：
结合缓冲液：20mM磷酸缓冲液、150mMNaCl、pH7.0
洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，PH3.0
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
（注：所用过柱液体在使用之前建议用至少小于等于0.45μm 滤膜过滤）
（1）样品预处理：细胞、植物、动物组织裂解液样品，最终总蛋白浓度选择在 0.5-1.0ug/ul 范围内为宜，上样前要确保样品溶液拥有合适的离子强度和 pH 值（如：可以用结合缓冲液对样品液进行稀释或透析）；哺乳动物细胞内有多种成分可以和 IgG 发生结合，可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带，可通过加入Normal IgG 和Protein AG-Berpharose FF的方式预处理裂解液样品，以降低非特异性结合。
（2）抗原-抗体复合物制备：将抗体与含有目的蛋白的裂解液混合，室温震荡孵育 30-60min（或4-8 度孵育过夜），形成抗原-抗体复合物（可根据已优化好的抗原抗体结合条件处理）。
（注意：抗体的加入量要依据填料量，抗体的加入量过多会影响到抗原-抗体混合物与填料的结合，故建议抗体加入量为填料载量的80%）
（3）填料平衡：取适量的Protein AG Berpharose FF 加入到 2ml 离心管中，500 r离心1min，弃上清，加入 0.5ml 结合缓冲液，悬浮填料，500 r离心 1min，弃上清，重复两次。
（4）抗原-抗体复合物的吸附：将抗原-抗体复合物加入到平衡好的填料中，均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管， 促使样品和填料充分接触并吸附，约 30min 后，500 r离心 1min，取上清液，留样检测。
（5） 除杂清洗：向上述离心管中加入 0.5ml 的结合缓冲液，悬浮填料，进行清洗，500 r离心 1min，吸弃上清，重复两次。
（6）抗原洗脱：
①非变性洗脱法（洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析）：向离心管中加入 5 倍柱体积的洗脱缓冲液，用移液器吹打 5 次， 混匀，然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管10min 后，500 r离心 1min，吸取上清液，收集洗脱组分，即为目标抗原，收集上清液至新的离心管中，并立即加入十分之一体积的中和缓冲液中和缓冲液调节其pH至中性，用于后期功能分析。
②变性洗脱法（洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测）：向离心管中加入 25ul 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95℃ 加热 5min。然后进行离心，200 r离心 1min，收集上清液，进行 SDS-PAGE 电泳，转膜后进行 Western 分析。
层析柱(预装柱)填料目录：
亲和层析填料(预装柱)
★蛋白A琼脂糖凝胶 FF (Portein A Berpharose FF)
★蛋白G琼脂糖凝胶 FF (Portein G Berpharose FF)
★耐碱蛋白A琼脂糖凝胶 FF (rat-Portein A Berpharose FF)
★蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶 FF (Portein AG Berpharose FF)
★镍-琼脂糖凝胶FF (Ni- Berpharose FF)
★链霉亲和素琼脂糖凝胶 FF (Streptavidin Berpharose FF)
★Strep-Tactin琼脂糖凝胶 FF (Strep-Tactin Berpharose FF) (StrepII标签蛋白纯化)
★肝素-琼脂糖凝胶 FF (Heparin- Berpharose FF)
★大豆胰蛋白酶抑制剂琼脂糖凝胶 FF (STI- Berpharose FF)
内毒素清除琼脂糖凝胶 (Endotoxin Removal Reagent Berpharose)
GST-琼脂糖凝胶FF (GST Berpharose FF)
钴-琼脂糖凝胶FF (Co- Berpharose FF)
真菌毒素检测免疫亲和柱
黄曲毒素（总量：B族G族、M1、B1）- 免疫亲和柱 (AFT-IAC)
赭曲霉毒素A-免疫亲和柱 (OTA-IAC)
玉米赤霉烯酮-免疫亲和柱 (ZEA-IAC )
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）-免疫亲和柱 (DON-IAC)
T-2毒素-免疫亲和柱 (T-2 toxin-IAC)
伏马毒素-免疫亲和柱 (FB1、FB2、FB3-IAC)
活化填料
NHS活化琼脂糖凝胶 FF (NHS Activated Berpharose FF)
环氧活化琼脂糖凝胶 FF ( Epoxy Activated Berpharose FF)
离子交换层析填料(预装柱)
DEAE-琼脂糖凝胶 FF（DEAE Berpharose FF）
Q-琼脂糖凝胶FF（Q Berpharose FF）
CM-琼脂糖凝胶FF（CM Berpharose FF）
SP-琼脂糖凝胶FF（SP Berpharose FF）
DEAE、Q、CM、SP（预装柱套装4支）
疏水层析填料(预装柱)
苯基-琼脂糖凝胶 FF（Phenyl Berpharose FF）
辛基-琼脂糖凝胶 FF（Octyl Berpharose FF）
丁基-琼脂糖凝胶 FF（Butyl Berpharose FF）
苯基、辛基、丁基（预装柱套装3支）
凝胶过滤层析填料(预装柱)
| 型号 | 分离范围 |
| 琼葡糖凝胶G10 | <700 |
| 琼葡糖凝胶 G15(脱盐柱) | 100-1500 |
| 琼葡糖凝胶 G25 (脱盐柱) | 1000-5000 |
| 琼葡糖凝胶 G50 | 1000-30000 |
| 琼葡糖凝胶 G75 | 3000-80000 |
| 琼葡糖凝胶 G100 | 4000-120000 |
| 琼葡糖凝胶 G150 | 5000-300000 |
| 琼葡糖凝胶 G200 | 5000-600000 |
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文献和实验【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。
[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然
色谱。此法较好，它分离效率高，上样量大，特别适合分离盐析沉淀的样品。 4.亲和色谱。是最有效的手段，关键了解目标物质的特性以便选择合适的亲和色谱填料。 二、主要用途介绍 1. 去除内毒素 内毒素也叫热源，一般是磷脂A，糖类和蛋白，在中性条件下带有负电荷。内毒素的磷脂部分有很强的疏水性，一般的在高盐情况下它们会聚合，所以不能用疏水色谱，如果蛋白本身的疏水性强，可以选择把目标蛋白结合到疏水色谱填料（苯基琼脂糖凝胶FF，丁基琼脂糖凝胶FF）上 和内毒素分离。 内毒素因为带有很强负电荷，如果目标蛋白
色谱。是最有效的手段，关键了解目标物质的特性以便选择合适的亲和色谱填料。二、主要用途介绍1.去除内毒素内毒素也叫热源，一般是磷脂A ，糖类和蛋白，在中性条件下带有负电荷。内毒素的磷脂部分有很强的疏水性，一般的在高盐情况下它们会聚合，所以不能用疏水色谱，如果蛋白本身的疏水性强，可以选择把目标蛋白结合到疏水色谱填料（苯基琼脂糖凝胶FF ，丁基琼脂糖凝胶FF ）上和内毒素分离。内毒素因为带有很强负电荷，如果目标蛋白带阳电荷，用DEAE 琼脂糖凝胶FF 或Q 琼脂糖凝胶FF 把内毒素吸附，达到去除内毒素的目的
