大家都在搜
手机验证
4℃保存
有效期2年
HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column,5ML
大量
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
点击查看
5ml
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML(His标签蛋白纯化预装柱,5ML) | 20504ES08 | 5 mL | 4℃ | 728.00 |
HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML(His标签蛋白纯化预装柱,5ML) | 20504ES25 | 5×5 mL | 4℃ | 2938.00 |
基质(Matrix) | 高度交联的6%琼脂糖凝胶 |
粒径(Bead size) | 45-165 µm |
载量(Capacity) | >40 mg 6×His-tagged protein/mL基质 |
耐压(Tolerance Pressuremax) | 0.3 MPa,3 bar |
储存缓冲液(Buffer) | 含20%乙醇的1×PBS |
柱子尺寸(Column Size) | 0.7×2.5 cm(1 mL) |
缓冲液名称 | 配方 | 配制1 L溶液所需各种试剂量 |
Lysis Buffer(pH 8.0) | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g |
Wash Buffer(pH 8.0) | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g |
Elution Buffer(pH 8.0) | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g |
缓冲液名称 | 配方 | 配制1 L溶液所需各种试剂量 |
Lysis Buffer(pH 8.0) | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
Urea 480.5 g NaH2PO4 ·2H2O 15.6 g Tris 15.76 g |
Wash Buffer(pH 6.3) | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至6.3,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
Urea 480.5 g NaH2PO4 ·2H2O 15.6 g Tris 15.76 g |
Elution Buffer(pH4.5) | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至4.5,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
Urea 480.5 g NaH2PO4 ·2H2O 15.6 g Tris 15.76 g |
试剂种类 | 浓度 |
还原剂 | 5 mM DTE 0.5-1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione |
变性剂 | 8 M urea 6 M Gua-HCl |
去污剂 | 2% TritonTM X-100,nonionic 2% TweenTM20,nonionic 2% NP-40,nonionic 2% Cholate,anionic 1% CHAPS,zwitterionic |
其他类 | 500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na2SO4 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate |
缓冲液 | 50 mM sodium phosphate,pH 7.4 100 mM Tris-HCl,pH 7.4 100 mM Tris-acetate,pH 7.4 100 mM HEPES,pH 7.4 100 mM MOPS,pH 7.4 100 mM sodium acetate,pH 7.4 |
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
柱子反压过高 | 填料被堵塞 | 裂解液中可能含微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22 µm或0.45 µm)过滤,或离心去除 |
样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5 µg/mL),Mg2+(终浓度1 mM),冰上孵育10-15 min | ||
样品太黏稠 | 有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。 | |
洗脱组分中无目的蛋白 | 蛋白可能是包涵体 | 可通过电泳检测裂解液,分析上清中是否有目的蛋白,包涵体蛋白需按照包涵体蛋白的纯化方式 |
表达量太低 | 优化表达条件,使用包涵体纯化缓冲体系 | |
目的蛋白结合比较弱,在洗杂步骤中已被洗下来 | 提高Wash Buffer的pH值,或者降低咪唑浓度 | |
目的蛋白结合过强,不容易洗脱下来 | 降低Elution Buffer 的pH,或者增加Elution Buffer中的咪唑浓度 | |
使用10-100 mM EDTA溶液剥离镍离子,同时得到蛋白 | ||
蛋白降解 | 菌体破碎时需添加一些蛋白酶抑制剂 | |
在4℃下进行纯化操作 | ||
洗脱组分不纯(含多种蛋白) | 洗杂不彻底 | 增加Wash Buffer 体积 |
样品中含有其他His标签蛋白 | 通过调节pH值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段(如去离子交换,疏水等)进一步纯化洗脱组分。 | |
填料颜色变浅或变成白色 | 镍离子脱落或者剥离 | 按照填料再生的操作重新挂镍离子 |
填料呈现褐色 | 缓冲液中含有DTT等还原剂 | 参考附3适当降低还原剂DTT的浓度,或改用巯基乙醇 |
上样过程中蛋白发生沉淀 | 操作温度太低 | 室温下进行上样 |
蛋白发生聚集 | 在样品和所有缓冲液中添加稳定剂,如0.1%Triton X-100或Tween-20 |
20502ES10 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin (His标签蛋白琼脂糖纯化树脂) | 10 mL |
20502ES50 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin (His标签蛋白琼脂糖纯化树脂) | 50 mL |
20502ES60 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin (His标签蛋白琼脂糖纯化树脂) | 100 mL |
20503ES10 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF (His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂) | 10 mL |
20503ES50 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF (His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂) | 50 mL |
20503ES60 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF (His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂) | 100 mL |
20505ES03 | HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1ML(His标签蛋白纯化预装柱,1ML) | 1 mL |
20505ES08 | HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1ML(His标签蛋白纯化预装柱,1ML) | 5×1 mL |
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
需要更多技术资料 索取更多技术资料