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- 2025年12月23日
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皓歌
实验步骤：
1.细胞蛋白与染色质交联：用37%的多聚甲醛处理细胞，并加入SDS Lysis Buffer
2.超声处理裂解DNA：为了将DNA超声为200-1000bp的小片段，此处需多次尝试，直到找到最佳的超声处理条件。
3.免疫共沉淀蛋白质/DNA：加入目的蛋白的抗体与靶蛋白-DNA复合物相互结合。
4.沉淀：加入ProteinA 结合抗体-靶蛋白-DNA复合物使之沉淀。
5.清洗沉淀复合物：去除非特异性结合。
6.洗脱：得到富集的靶蛋白-DNA复合物
7.解交联：纯化富集的目的DNA片段
8.普通PCR (提供凝胶图片，并提供凝胶光密度分析软件IOD分析结果)
9.荧光定量PCR分析.(提供要检测的目的基因的荧光定量原始文件和实验分析柱形图。并附带实验结果说明)
实验周期：实验耗时长短：30个工作日.
实验设计：
阳性对照（系统阳性对照，Anti-RNA Polymerase II）
Input对照（DNA片段在沉淀以前，收集下来的对照）
阴性对照（非免疫IgG血清吸附，Normal Mouse IgG）
实验组1（加入XX抗体交联）
客户提供：
1.客户只提供活的细胞样本（细胞数量分装为10份，每份大于1X107）
2.细胞物种信息：
3.CHIP抗体及信息：
4.检测基因名称 ：
5.细胞样本运输：干冰运输
报价咨询QQ 470893403
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文献和实验ChIP是一种强大的确定蛋白或者组蛋白修饰在基因组上定位的实验方法。染色质被分离出来后采用抗体与抗原的结合来判定目的蛋白是否结合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白结合位点在全基因组范围的分布（微阵列或DNA序列）。这种方法具有空间性与时效性。该实验设计为如何在细胞中进行ChIP实验提供了详细的步骤。1. 交联和细胞收获甲醛可以将蛋白质交联到DNA上。交联结果的好坏决定于交联时间的把握。我们建议样品交联的时间一般为2-30分钟。过度的交联会减少抗原的结合性和超声断裂的效率。抗原决定簇也会被掩盖
染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation，ChIP）是一种用于研究目的蛋白在染色质上定位的技术。ChIP 的原理是通过甲醛处理细胞固定 DNA 和蛋白，然后提取染色质，使用超声或酶解将染色质剪切成小片段。 之后使用结合在染色质的目的蛋白或组蛋白修饰特异性抗体富集 DNA 片段。富集的 DNA 片段可以通过 PCR，DNA 芯片或测序进行分析。虽然原理看起来很简单，但 ChIP 是一项非常具有挑战的技术，很多因素都可能导致实验
真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在。因此，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, CHIP）是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白
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