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细胞转染
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富衡生物
通过瞬时转染或稳定转染对外源蛋白进行表达或对内源蛋白进行过表达或沉默。
客户提供
1 表达质粒,shRNA,siRNA及慢病毒载体
2 细胞株
注:细胞样品的运输方法请选择以下方式
冻存细胞样品,以干冰运输
培养细胞样品,密封培养瓶灌满生长培养基运输
提交物品
实验报告,转染细胞株(后续实验未在本公司进行的瞬时转染项目及稳定转染细胞系构建时)
费用标准
瞬时转染2000.00/基因
稳定转染5000.00-50000.00/基因
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文献和实验到细胞完全从壁上脱落下来为止。 (4) 加入1ml的含血清培养基终止反应。 (5) 用Tip头多次吹吸,使细胞完全分散开。 (6) 将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。 (7) 用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。 (8) 将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。 (9) 将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。 2、细胞转染 (1)转染试剂的准备 A. 将400ul去核酸酶水加入管中
细胞转染的方法主要有三种,分别是磷酸钙-DNA 共沉淀法、DEAE-葡聚糖转染、脂质体介导 DNA 转染法,今天师兄就先从磷酸钙-DNA共沉淀法讲起。 磷酸钙-DNA共沉淀法 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时,可使 DNA 附在细胞表面,这回利于细胞吞入摄取核酸,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内,进入细胞的DNA,仅有1%~5%可以进入细胞核中,其中仅有不到1%的DNA可以与细胞 DNA 整合,在细胞中进行稳定表达,基因转导的频率大约为10-4,这项技术
稳定细胞株构建的第一个步骤就是细胞转染,这项实验的原理大家都清楚,但是为什么一上手就会出现多种问题,在实验第一步就栽了跟头呢? 是细胞转染方法不对头?还是实验过程中的某个因素影响了转染效率?了解本文这11个注意事项,让你的细胞转染实验顺利通关! 所谓转染,是指在真核细胞里导入具有生物功能的核酸并核酸的生物功能。通常选用的转染方法包括物理介导法(如电穿孔法、显微注射和基因枪等)、化学介导法(如磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、多种阳离子物质介导法)、生物介导法(如原生质体转染、病毒介导转染
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