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- 2025年12月08日
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- 服务名称：
细胞实验技术服务
- 提供商：
伊莱博生物科技（上海）有限公司
稳定细胞株构建
稳定细胞株构建服务：
构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
稳定细胞株的构建周期长、难度大，每一步都很关键，尤其是细胞转染，常用物理方法（电转）、化学方法（脂质体等）、生物方法（病毒），根据不同的实验条件，选择好的方法，来达到实验目的。
上海伊莱博生物在稳定细胞株构建上拥有丰富的经验，熟悉每一步操作，尤其对关键步骤有独到的经验，成功为众多科研客户构建目的细胞株（过表达、可诱导过表达、沉默、可诱导沉默、报告基因等等）。
a，蛋白过表达
目的蛋白的过表达往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段，也是借助表达系统富集蛋白（DHFR、GS system）的方法。蛋白过表达稳定细胞株的构建能很好的帮助研究这个蛋白，或者得到大量的目的蛋白。
上海伊莱博生物提供的蛋白过表达稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统，构建含有目的基因CDS的质粒/病毒，通过转染/感染在各种细胞基因组上整合目的基因，利用抗生素筛选，得到稳定表达的高拷贝克隆，经过32代的稳定性QC检测，完成稳定细胞株的构建工作。
主要包含如下步骤:
1. 载体构建（表达质粒载体、病毒载体）；
2. 转染/感染；
3. 目的蛋白初步检测；
4. 抗生素筛选；
5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
特殊的过表达蛋白/细胞，请事先咨询。
b，蛋白沉默
目的蛋白的沉默（knock-down or knock-out）往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段,蛋白沉默后细胞表型的检测是科研的金标准方法。
稳定细胞株构建服务：
构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
稳定细胞株的构建周期长、难度大，每一步都很关键，尤其是细胞转染，常用物理方法（电转）、化学方法（脂质体等）、生物方法（病毒），根据不同的实验条件，选择好的方法，来达到实验目的。
上海伊莱博生物在稳定细胞株构建上拥有丰富的经验，熟悉每一步操作，尤其对关键步骤有独到的经验，成功为众多科研客户构建目的细胞株（过表达、可诱导过表达、沉默、可诱导沉默、报告基因等等）。
a，蛋白过表达
目的蛋白的过表达往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段，也是借助表达系统富集蛋白（DHFR、GS system）的方法。蛋白过表达稳定细胞株的构建能很好的帮助研究这个蛋白，或者得到大量的目的蛋白。
上海伊莱博生物提供的蛋白过表达稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统，构建含有目的基因CDS的质粒/病毒，通过转染/感染在各种细胞基因组上整合目的基因，利用抗生素筛选，得到稳定表达的高拷贝克隆，经过32代的稳定性QC检测，完成稳定细胞株的构建工作。
主要包含如下步骤:
1. 载体构建（表达质粒载体、病毒载体）；
2. 转染/感染；
3. 目的蛋白初步检测；
4. 抗生素筛选；
5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
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b，蛋白沉默
目的蛋白的沉默（knock-down or knock-out）往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段,蛋白沉默后细胞表型的检测是科研的金标准方法。
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