- 询价
- 上海
- 稳定细胞株构建
- 2025年12月30日
企业认证
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
细胞实验技术服务
- 提供商：
伊莱博生物科技（上海）有限公司
稳定细胞株构建服务：
构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
稳定细胞株的构建周期长、难度大，每一步都很关键，尤其是细胞转染，常用物理方法（电转）、化学方法（脂质体等）、生物方法（病毒），根据不同的实验条件，选择好的方法，来达到实验目的。
上海伊莱博生物在稳定细胞株构建上拥有丰富的经验，熟悉每一步操作，尤其对关键步骤有独到的经验，成功为众多科研客户构建目的细胞株（过表达、可诱导过表达、沉默、可诱导沉默、报告基因等等）。
a，蛋白过表达
目的蛋白的过表达往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段，也是借助表达系统富集蛋白（DHFR、GS system）的方法。蛋白过表达稳定细胞株的构建能很好的帮助研究这个蛋白，或者得到大量的目的蛋白。
上海伊莱博生物提供的蛋白过表达稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统，构建含有目的基因CDS的质粒/病毒，通过转染/感染在各种细胞基因组上整合目的基因，利用抗生素筛选，得到稳定表达的高拷贝克隆，经过32代的稳定性QC检测，完成稳定细胞株的构建工作。
主要包含如下步骤:
1. 载体构建（表达质粒载体、病毒载体）；
2. 转染/感染；
3. 目的蛋白初步检测；
4. 抗生素筛选；
5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
特殊的过表达蛋白/细胞，请事先咨询。
b，蛋白沉默
目的蛋白的沉默（knock-down or knock-out）往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段,蛋白沉默后细胞表型的检测是科研的金标准方法。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验w_dennis 请教各位高人前辈，有做过基因的部分核苷酸缺失后，回补株构建实验吗？如何操作？ 请教下pBAD/gⅢ和pBR322质粒构建回补株的原理？叩谢！！:) woxingwosu 看看这个有没有帮助了： http://journal.shouxi.net/qikan/article.php?id=534304 w_dennis 谢谢，请问有pBAD/gⅢ和pBR
用慢病毒筛选稳定细胞株，以G418筛选方法为例，筛选出稳定整合Neomycin抗性基因的细胞系。 A 、 G418 抗生素最优浓度筛选 每种细胞对抗生素的敏感性不同，因此，准备建立稳定细胞系之前，需要确定能够在10-14天杀死细胞的最佳浓度。 方法如下 ： 1、将细胞稀释到1000个细胞/mL，接种到24孔板，每孔1ml。 2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。3、每隔3天跟换1次培养液，保持G418浓度不变。 4、选择出
1. 2 稳定转染细胞株的构建 原理： 稳定转染，就是转染的质粒DNA 整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可 长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 应用： 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（稳定，可长期进行研究） 一般流程：
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
