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- 2026年01月19日
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分子生物学技术服务
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伊莱博生物科技（上海）有限公司
chip染色质免疫共沉淀技术
研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, CHIP）是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DN***段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。CHIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。
ChIP实验操作流程：
1、样品准备与交联
细胞收集后，用37%的formaldehyde处理细胞，交联核酸与DNA结合蛋白；
2.超声打断染色质
裂解细胞，用Bioruptor将染色质超声破碎成200－1000bp片断；将片段分为两份，一份用于免疫共沉淀，一份用于对照。
3、免疫共沉淀(IP)
取B步骤所得一份片断与ChIP特异抗体结合进行免疫共沉淀，利用免疫磁珠法富集抗体复合物。
4、解交联及纯化DNA
将富集的DNA/蛋白复合物解交联释放DNA片段，并进行纯化（IP DNA）；B步骤所得用于对照（Input DNA）的片断作不进行IP实验，但也要解交联并纯化。
5、DNA段PCR扩增
针对ChIP DNA, Input DNA及对照DNA的目的片段设计特异性引物并进行荧光定量PCR扩增。
6、结果分析
%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%
Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( Negative control/Input)]
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文献和实验ChIP是一种强大的确定蛋白或者组蛋白修饰在基因组上定位的实验方法。染色质被分离出来后采用抗体与抗原的结合来判定目的蛋白是否结合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白结合位点在全基因组范围的分布（微阵列或DNA序列）。这种方法具有空间性与时效性。该实验设计为如何在细胞中进行ChIP实验提供了详细的步骤。1. 交联和细胞收获甲醛可以将蛋白质交联到DNA上。交联结果的好坏决定于交联时间的把握。我们建议样品交联的时间一般为2-30分钟。过度的交联会减少抗原的结合性和超声断裂的效率。抗原决定簇也会被掩盖
真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在。因此，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, CHIP）是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白
Active Motif ChIP 实验专家技术经验分享：如何判断 ChIP 成功与否？
通过计算富集度，我们就可以清楚地知道目的蛋白在感兴趣的 DNA 区域的结合强弱。如下图所示：确定 ChIP 成功之后可以将样品建库，测序用于全基因组分析。相关链接：Active Motif 技术专家经验分享：如何才能做好 ChIP 实验？Active Motif ChIP 实验相关对照产品：>> ChIP-IT® Control Kits>> ChIP Control qPCR Primer Sets>> ChIP-IT® qPCR Analysis Kit更多产品详情欢迎咨询 Active
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