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100ml（促销）
万类生物试剂促销：试剂盒8折优惠，Western及IP细胞裂解液-100ml 试剂盒 原价199元，现价160元。
产品名称：Western及IP细胞裂解液（试用装10ml）
产品概述：
Western及IP细胞裂解液（Cell lysis buffer for Western and Ip）是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中提取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。Western及IP细胞裂解液提取的蛋白可应用于PAGE、Western Blot、IP、co-IP等。
Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH 7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，Na3VO4 ，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。
包装信息：
保存条件：
-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。。
注意事项：
1.使用Western及IP细胞裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，此产品可单独向本公司订购如：WLA004 BCA蛋白定量试剂盒。由于本品含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，故不能使用Bradford法进行蛋白定量。
2.建议在使用Western及IP细胞裂解液前，向溶液中加入PMSF或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。
3.为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行
该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、Li J; Ye W; Xu W, et al., Activation of autophagy inhibits epithelial to mesenchymal transition process of human lens epithelial cells induced by high glucose conditions. Cell Signal 2020, 75, 109768.
PubMed: 32896607
2、Ou Y; Zhu L; Xu S, et al., Activation of RAW264.7 macrophage by Exopolysaccharide from Aphanothece halaphytica (EPSAH) and the underlying mechanisms. Fundam Clin Pharmacol 2020.
PubMed: 32083746
3、Wu H; Pang P; Liu M D, et al., Upregulated miR20a5p expression promotes proliferation and invasion of head and neck squamous cell carcinoma cells by targeting of TNFRSF21. Oncol Rep 2018, 40 (2), 1138-1146.
PubMed: 29901115
4、Wang Y; Chai Y; He X, et al., Intermittent hypoxia simulating obstructive sleep apnea causes pulmonary inflammation and activates the Nrf2/HO-1 pathway. Exp Ther Med 2017, 14 (4), 3463-3470.
PubMed: 29042934
5、Wang X; Cao P; Liu J, et al., 5-Aminolaevulinic Acid-Based Photodynamic Therapy Restrains Pathological Hyperplasia of Fibroblasts. Med Sci Monit 2017, 23, 46-56.
PubMed: 28052053
操作流程
Ⅰ细胞样品
1. 贴壁细胞蛋白抽提
（1）小心倾去贴壁细胞的培养液。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果，请先用预冷的 PBS漂洗细胞。
（3）加入适量 Western及IP细胞裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1。
表1.贴壁细胞Western及IP细胞裂解液使用量推荐表
（4）将Western及IP细胞裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
（1）悬浮细胞2500×g 离心5min，弃去上清。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质，请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min，弃去上清。
（3）加入适量Western及IP细胞裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），每5×106细胞加入约200-500µl Western及IP细胞裂解液，吹打均匀。
（4）冰上放置20min，使细胞充分裂解
（5）14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
Ⅱ组织样品：
1.取适当的Western及IP细胞裂解液，在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量，按照1 10（g/ml）的比例加入Western及IP细胞裂解液后将组织剪成细小碎片， 用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
产品名称：Western及IP细胞裂解液（试用装10ml）
产品概述：
Western及IP细胞裂解液（Cell lysis buffer for Western and Ip）是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中提取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。Western及IP细胞裂解液提取的蛋白可应用于PAGE、Western Blot、IP、co-IP等。
Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH 7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，Na3VO4 ，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。
包装信息：
保存条件：
-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。。
注意事项：
1.使用Western及IP细胞裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，此产品可单独向本公司订购如：WLA004 BCA蛋白定量试剂盒。由于本品含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，故不能使用Bradford法进行蛋白定量。
2.建议在使用Western及IP细胞裂解液前，向溶液中加入PMSF或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。
3.为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行
该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、Li J; Ye W; Xu W, et al., Activation of autophagy inhibits epithelial to mesenchymal transition process of human lens epithelial cells induced by high glucose conditions. Cell Signal 2020, 75, 109768.
PubMed: 32896607
2、Ou Y; Zhu L; Xu S, et al., Activation of RAW264.7 macrophage by Exopolysaccharide from Aphanothece halaphytica (EPSAH) and the underlying mechanisms. Fundam Clin Pharmacol 2020.
PubMed: 32083746
3、Wu H; Pang P; Liu M D, et al., Upregulated miR20a5p expression promotes proliferation and invasion of head and neck squamous cell carcinoma cells by targeting of TNFRSF21. Oncol Rep 2018, 40 (2), 1138-1146.
PubMed: 29901115
4、Wang Y; Chai Y; He X, et al., Intermittent hypoxia simulating obstructive sleep apnea causes pulmonary inflammation and activates the Nrf2/HO-1 pathway. Exp Ther Med 2017, 14 (4), 3463-3470.
PubMed: 29042934
5、Wang X; Cao P; Liu J, et al., 5-Aminolaevulinic Acid-Based Photodynamic Therapy Restrains Pathological Hyperplasia of Fibroblasts. Med Sci Monit 2017, 23, 46-56.
PubMed: 28052053
操作流程
Ⅰ细胞样品
1. 贴壁细胞蛋白抽提
（1）小心倾去贴壁细胞的培养液。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果，请先用预冷的 PBS漂洗细胞。
（3）加入适量 Western及IP细胞裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1。
表1.贴壁细胞Western及IP细胞裂解液使用量推荐表
| 细胞培养类型 | Western及IP细胞裂解液使用量 |
| 100mm | 500-1000μl |
| 60mm | 250-500μl |
| 6孔培养板 | 200-400μl/孔 |
| 24孔培养板 | 100-200μl/孔 |
| 96孔培养板 | 50-100μl/孔 |
（4）将Western及IP细胞裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
（1）悬浮细胞2500×g 离心5min，弃去上清。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质，请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min，弃去上清。
（3）加入适量Western及IP细胞裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），每5×106细胞加入约200-500µl Western及IP细胞裂解液，吹打均匀。
（4）冰上放置20min，使细胞充分裂解
（5）14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
Ⅱ组织样品：
1.取适当的Western及IP细胞裂解液，在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量，按照1 10（g/ml）的比例加入Western及IP细胞裂解液后将组织剪成细小碎片， 用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
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文献和实验该产品被引用文献
该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、Li J; Ye W; Xu W, et al., Activation of autophagy inhibits epithelial to mesenchymal transition process of human lens epithelial cells induced by high glucose conditions. Cell Signal 2020, 75, 109768.
PubMed: 32896607
2、Ou Y; Zhu L; Xu S, et al., Activation of RAW264.7 macrophage by Exopolysaccharide from Aphanothece halaphytica (EPSAH) and the underlying mechanisms. Fundam Clin Pharmacol 2020.
PubMed: 32083746
3、Wu H; Pang P; Liu M D, et al., Upregulated miR20a5p expression promotes proliferation and invasion of head and neck squamous cell carcinoma cells by targeting of TNFRSF21. Oncol Rep 2018, 40 (2), 1138-1146.
PubMed: 29901115
4、Wang Y; Chai Y; He X, et al., Intermittent hypoxia simulating obstructive sleep apnea causes pulmonary inflammation and activates the Nrf2/HO-1 pathway. Exp Ther Med 2017, 14 (4), 3463-3470.
PubMed: 29042934
5、Wang X; Cao P; Liu J, et al., 5-Aminolaevulinic Acid-Based Photodynamic Therapy Restrains Pathological Hyperplasia of Fibroblasts. Med Sci Monit 2017, 23, 46-56.
PubMed: 28052053
1、Li J; Ye W; Xu W, et al., Activation of autophagy inhibits epithelial to mesenchymal transition process of human lens epithelial cells induced by high glucose conditions. Cell Signal 2020, 75, 109768.
PubMed: 32896607
2、Ou Y; Zhu L; Xu S, et al., Activation of RAW264.7 macrophage by Exopolysaccharide from Aphanothece halaphytica (EPSAH) and the underlying mechanisms. Fundam Clin Pharmacol 2020.
PubMed: 32083746
3、Wu H; Pang P; Liu M D, et al., Upregulated miR20a5p expression promotes proliferation and invasion of head and neck squamous cell carcinoma cells by targeting of TNFRSF21. Oncol Rep 2018, 40 (2), 1138-1146.
PubMed: 29901115
4、Wang Y; Chai Y; He X, et al., Intermittent hypoxia simulating obstructive sleep apnea causes pulmonary inflammation and activates the Nrf2/HO-1 pathway. Exp Ther Med 2017, 14 (4), 3463-3470.
PubMed: 29042934
5、Wang X; Cao P; Liu J, et al., 5-Aminolaevulinic Acid-Based Photodynamic Therapy Restrains Pathological Hyperplasia of Fibroblasts. Med Sci Monit 2017, 23, 46-56.
PubMed: 28052053
相关实验
制成50％ 悬液。 每 1mL 细胞裂解液上清加入 100 µL Agarose protein A+G 珠子，4℃ 振荡 10 min，进行预清除。 4℃，10000 rpm 离心10 min移去 Agarose protein A+G 珠子，转移上清至一新离心管中。 用 Bradford 法（考马斯亮蓝染色法）测定上清蛋白浓度。（应至少将细胞裂解液作 1:10 稀释后再测定，这是因为存在于裂解液中的去污剂成分会干扰考马斯亮蓝的作用）。 根据所测得的细胞裂解液蛋白浓度，用 PBS
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe： 1.称取 790 mg 的 Tris-Base，加到 75 ml 去离子水中，加入 900 mg 的 NaCl，搅拌
或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴
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Western及IP细胞裂解液-100ml
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