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100
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上海远慕生物科技
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250g
货号:YM-BG01176
保质期: 24个月
供应溶菌酶【培养基配制】
先计算所需培养基之份量 (体积),依已商品化培养基产品上之指示称取所需克数,并加入蒸馏水。
1)搅拌均匀后,于微波炉中加热数分钟将所有成份溶解后
2)利用分注器进行分装(切勿锁紧盖子!)。接著放入杀菌釜中进行灭菌工作
3)若是配制slant 则需于灭完菌后趁 培养基未凝固前锁上盖子并斜放 (可用厚书辅助);若是配置broth或deep agar 可等其冷却后再锁紧盖子,并放入4℃冰箱中保存备用。
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供应溶菌酶【培养基种类与基本成分】
1)氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
2)碳水化合物是细胞生长主要能量来源,其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
3)培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外,通过提供钠、钾和钙离子,帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素,细胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离子浓度。
4)大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。 HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。
5)在细胞培养中,尽管血清是维生素重要来源,但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。
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文献和实验溶菌酶 溶菌酶(1ysozyme)因具有溶菌活性而得名。根据作用对象,分为细菌胞壁溶菌酶和真菌胞壁溶菌酶;根据来源,分为人、动物、植物和微生物溶菌酶。人溶菌酶检出于泪液、唾液、乳汁等,由M中组成性地产生。动物中的溶菌酶以鸡蛋清中含量最高,是溶菌酶的代表。鸡蛋清溶菌酶属于一种稳定的碱性蛋白,由129个氨基酸残基组成,分子质量为14kDa。 溶菌酶可直接作用于革兰阳性菌胞壁裸露的肽聚糖。肽聚糖由三种成分共同构成立体网状结构,即N-乙酰
一种低分子量( 14700道尔顿)的、不耐热的碱性蛋白质,其中富含精氨酸。人体内许多组织及体液中都含有溶菌酶,以乳汁、唾液、肠道以及吞噬细胞溶酶体颗粒中含量较多,组织中含量较少。正常的尿液、汗液及脑脊液中不含溶菌酶。溶菌酶能直接水解革兰氏阳性菌细胞壁中乙酰葡糖胺与乙酰胞壁酸分子间的连接,使细胞壁破坏,水分进入,细胞崩解。而革兰氏阴性菌细胞壁粘肽层外有一层脂多糖和脂蛋白,故不受溶菌酶的影响。在抗体存在下,脂多糖及脂蛋白受到破坏时,溶菌酶才能发挥作用;在有抗体、补体、溶菌酶
亦称胞壁质酶。 EC. 3. 2. 1. 17.作用于细菌细胞壁的胞壁质,水解 N-乙酰胞壁酸与 N-乙酞葡糖胺之间的β -1, 4-胞壁酰胺键。因此当它作用于活菌时,由细胞壁造成的抗渗透压作用就会丧失,从而产生溶菌现象。另外,对反应产物寡糖的测定,可为细胞壁化学结构的研究提供重要手段。广泛存在于动物的各种组织、分泌液以及卵白中。从一些植物(甘蓝,芜菁等)中也发现有该酶存在。卵白中含量多且易于结晶提纯,因此对卵白溶菌酶进行了广泛的研究。该酶对硝基苯 -N, N′ -二乙酰二糖苷那种合成二
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