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100
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上海远慕生物科技
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250g
货号:YM-BG01069
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供应亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础【培养基配制】
先计算所需培养基之份量 (体积),依已商品化培养基产品上之指示称取所需克数,并加入蒸馏水。
1)搅拌均匀后,于微波炉中加热数分钟将所有成份溶解后
2)利用分注器进行分装(切勿锁紧盖子!)。接著放入杀菌釜中进行灭菌工作
3)若是配制slant 则需于灭完菌后趁 培养基未凝固前锁上盖子并斜放 (可用厚书辅助);若是配置broth或deep agar 可等其冷却后再锁紧盖子,并放入4℃冰箱中保存备用。
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供应亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础【培养基种类与基本成分】
1)氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
2)碳水化合物是细胞生长主要能量来源,其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
3)培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外,通过提供钠、钾和钙离子,帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素,细胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离子浓度。
4)大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。 HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。
5)在细胞培养中,尽管血清是维生素重要来源,但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。
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文献和实验成分 胰酶消化酪蛋白胨 15g 酵母膏 10g 柠檬酸铁 0.5g 琼脂 15g 蒸馏水 1000mL 10%亚硫酸钠水溶液(新配) 5mL 0.12%多粘菌素B硫酸盐水溶液 10mL 1.2%磺胺嘧啶钠水溶液 10mL pH7.0 制法 :前面五种成分配合后加热溶解
PCR 是众所周知的分子生物学技术之一。20 世纪 70 年代,研究人员首次报道了使用合成引物和 DNA 聚合酶从模板复制单链 DNA。然而直到 1983 年,Kary Mullis 才发明出用于扩增目标 DNA 的研究工具,就是我们今天所熟知的 PCR 方法。从此以后,PCR 成为分子生物学研究必不可少的一部分,被广泛应用于基础研究、疾病诊断、农业检测和法医调查等领域。 1.基因表达 通常可通过 PCR 来检测不同细胞类型、组织和生物体在特定时间点的基因表达差异。首先,从目标样品中分离出
10.0mg 多粘菌素B(polymyxin) 2500.0国际单位 冻溶马血 70.0mL 制法 1 除甲氧苄氨嘧啶、抗生素和冻溶马血外,将其他成分混合溶解。校正pH7.4,装瓶100mL。121℃ 高压灭菌15min,备用。此即血琼脂基础培养基。 2 临用前,加热溶解基础培养基,冷至60℃。每100mL基础培养基中,加入冻溶两次的马血7mL及 TMP、抗生素混合液0.5mL,摇匀
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