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100
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上海远慕生物科技
- 规格:
250g
货号:YM-BG01038
保质期: 24个月
供应品红亚硫酸钠琼脂【培养基配制】
先计算所需培养基之份量 (体积),依已商品化培养基产品上之指示称取所需克数,并加入蒸馏水。
1)搅拌均匀后,于微波炉中加热数分钟将所有成份溶解后
2)利用分注器进行分装(切勿锁紧盖子!)。接著放入杀菌釜中进行灭菌工作
3)若是配制slant 则需于灭完菌后趁 培养基未凝固前锁上盖子并斜放 (可用厚书辅助);若是配置broth或deep agar 可等其冷却后再锁紧盖子,并放入4℃冰箱中保存备用。
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供应品红亚硫酸钠琼脂【培养基种类与基本成分】
1)氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
2)碳水化合物是细胞生长主要能量来源,其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
3)培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外,通过提供钠、钾和钙离子,帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素,细胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离子浓度。
4)大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。 HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。
5)在细胞培养中,尽管血清是维生素重要来源,但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。
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文献和实验标签。 3.实验所需药口及配制 浓盐酸(36—38%),碱性品红,偏重亚硫酸钠(Na 2 S 2 O 5 ); 亚硫酸钠(Na 2 SO 3 ),固绿(fast green),加拿大中性树胶乙醇(30—100%),二甲苯。 药品配制: 1各种浓度的乙醇配制. 21NHCI配制:取浓HCI 82.5毫升加蒸馏水至1000毫升,摇匀。 3Sciff 试剂的配制
DNA的细胞化学:孚尔根反应(Feulgen Reaction)
验 原 理 自Feulgen等发明该显示DNA的Feulgen反应法以来,其作用机制也久经研究和讨论,现已取得一致意见。其具体反应原理是,标本经稀盐酸水解后,DNA分子中的嘌呤碱基被解离,从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff 试剂 中的无色品红可与醛基反应,形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团,故可呈现出紫红色。也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基,具有还原作用,可与无色品红结合形成紫红色化合物,从而显示出DNA的分布。其反应机制如下图所示
了Feulgen反应的专一性。2.实验用品材料:(1).Carnoy液固定的鼠肝石蜡切片(2).Carnoy液固定的洋葱根尖或蚕豆根尖切片。试剂:(1).Carnoy固定液:3份95%酒精加入1份冰醋酸。(2).1 mol/L HCl:取比重1.18的浓HCl 82.5ml,加水至100ml。(3).Schiff试剂先将200ml蒸馏水煮沸,由火上取下,加入碱性品红1g,充分搅拌,有助于溶解。待先将200ml蒸馏水煮沸,由火上取下,加入碱性品红1g,充分搅拌,有助于溶解。待亚硫酸钾或偏亚硫酸钠充分振荡后盖紧
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