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100
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上海远慕生物科技
- 规格:
250g
货号:YM-BG00813
保质期: 24个月
供应液体硫乙醇酸盐培养基【培养基配制】
先计算所需培养基之份量 (体积),依已商品化培养基产品上之指示称取所需克数,并加入蒸馏水。
1)搅拌均匀后,于微波炉中加热数分钟将所有成份溶解后
2)利用分注器进行分装(切勿锁紧盖子!)。接著放入杀菌釜中进行灭菌工作
3)若是配制slant 则需于灭完菌后趁 培养基未凝固前锁上盖子并斜放 (可用厚书辅助);若是配置broth或deep agar 可等其冷却后再锁紧盖子,并放入4℃冰箱中保存备用。
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供应液体硫乙醇酸盐培养基【培养基种类与基本成分】
1)氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
2)碳水化合物是细胞生长主要能量来源,其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
3)培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外,通过提供钠、钾和钙离子,帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素,细胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离子浓度。
4)大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。 HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。
5)在细胞培养中,尽管血清是维生素重要来源,但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。
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文献和实验成分 胰酶消化酪蛋白胨 15g L-胱氨酸 0.5g 葡萄糖 5g 酵母膏 5g 氯化钠 2.5g 硫乙醇酸钠 0.5g 刃天青(Resazurin) 0.001g 琼脂 0.75g 蒸馏水 1000mL pH
,防止过氧化物的积累对某些菌产生毒性,有利于厌氧菌的生长,另外,硫乙醇酸盐有钝化含砷和汞类药物及其他金属防腐剂的有害作用;刃天青作为氧化还原的指示剂,氧化时呈红色,以此指示培养基的氧化还原电位;琼脂可以防止液体对流,即防止二氧化碳、氧气和还原产物的扩散,有利于厌氧环境的形成。三、硫乙醇酸盐流体培养基的特点:从硫乙醇酸盐流体培养基的成分分析可以总结出该培养基的特点主要有:含有较全面的营养,能满足绝大多数细菌的营养需求;培养基的不同深度上层、中层、下层部位可以分别模拟提供有氧、弱氧至无氧不同氧含量的梯度
用于纯种细菌的增菌及观察细菌在液体环境中的生长特征(混浊生长,表面生长或沉淀生长) (1)材料 肉汤培养基 斜面培养物(大肠埃希菌、化脓性链球菌、枯草芽胞杆菌) (2)方法 ①取接种环在火焰上灼烧灭菌、冷却。 ②以“双管移植法”左手持细菌斜面培养物和肉汤培养基两支试管,右手持接种环,按无菌操作法取少量细菌,将沾菌的接种环在斜倾的接近液面的管壁上轻轻涂抹研匀,试管直立使沾附在管壁上的细菌没入液体中,接种后放37℃恒温箱中培养。 (3)结果 ①浑浊生长
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