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脱氧核糖核酸酶 I(无 RNase)

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       转录反应后 DNA 模板的降解
    ■    除去 RNA 样品中污染的基因组 DNA
       DNase I 印迹分析法
    ■  切刻翻译


    概述
    DNase I (RNase-Free)是一种非特异性核酸内切酶,切割DNA产生具有3´羟基和5´磷酸末端的二、三和寡核苷酸产物(1,2)。DNase I 可作用于单链、双链-DNA、染色质和RNA:DNA杂交体。


    来源
    重组 E. coli 菌珠,含有牛胰腺 DNase I 的 MBP 融合克隆。


    反应条件
    1X DNase I 反应缓冲液, [10 mM Tris-HCl (pH 7.6 @25°C), 2.5 mM MgCl2 , 0.5 mM CaCl2 ]。37°C温育。


    质保声明
    无核糖核酸酶污染。


    单位定义
    1 单位指在 50 μl DNase I 反应缓冲液中,37°C 10 分钟条件下,完全降解 1 μg pBR322 DNA 所需要的酶量。
    完全降解是指绝大多数的 DNA 片段减少成为四核苷酸或更短。


    浓度
    2,000 units/ml。


    贮存条件
    10 mM Tris-HCl (pH 7.6), 2 mM CaCl2 和 50% 甘油。-20°C 储存。


    热失活
    75°C 10分钟。


    注意事项
    应添加终浓度为 5 mM 的 EDTA,以避免 RNA 在酶失活过程中被降解(3) 。


    参考文献
    (1) Kunitz, M. (1950) J. Gen. Physiol ., 33, 349–362.
    (2) Vanecko, S. and Laskowski, M. (1961) J. Biol. Chem ., 236, 3312–3316.
    (3) Huang, Z. (1996) Biotechniques , 20, 1012–1020.


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