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文献和实验诺奖得主 Jennifer 最新研究:CRISPR/Cas12c 无需切割 DNA 就可实现基因沉默,抵御病毒入侵
这些与导向 RNA 互补的底物。因此,这些结果表明 Cas12c 是 RNase(核糖核酸酶),而不是 DNase(脱氧核糖核酸酶),无法对 DNA 进行切割。 图片来源:Molecular Cell Cas12c RuvC 结构域负责 pre-crRNA 的处理 随后,研究人员推测 Cas12c 的 RuvC 核酸酶结构域是执行 pre-crRNA 加工的部位。与该假说一致的是,当将 RuvC 金属配位羧酸盐突变后,Cas12c 的 pre-crRNA 处理活性随即丧失。 为了验证
溶解度相差很大,核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度,脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后,用 0 . 14mol / L 氯化钠溶液抽提,可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠,可抑制脱氧核糖核酸酶对 DNA 的水解作用。 SDS( 十二烷基硫酸钠 ) 能使脱氧核糖核蛋白产生解聚作用,在含有脱氧核糖核蛋白的溶液中加入 SDS , DNA 即与蛋白质分离开,用氯仿将蛋白质沉淀除去,而 DNA 溶解于水相,最后用冷乙醇将 DNA 析出,而获得纯化的 DNA 。在氯仿中加入少量异戊醇能减少
检测:质粒电泳一般有三条带,分别为质粒的超螺旋、开环、线型三种构型。 DNA提取过程中各种 试剂 的作用及原理 溶液I—溶菌液: 溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制。 葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械剪切力作用而降解。 EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶
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