TC处理12孔板圆形细胞爬片(直径20mm),灭菌

培养基的配制和灭菌

素B1、B12、C和泛酸、抗生素、酶、植物 提取液（活性丧失）。所以，原生质体培养用培养基应采用过滤法灭菌。 表4 培养基或无菌水的最少灭菌时间 容器分装体积（mL） 121℃下最少灭菌时间（min） 20~60 15 75~150 20 250~500 25 1000以上 30以上 过滤灭菌可以除去溶液或液体培养基中直径大于过滤膜网孔直径的微粒、微生物 和病毒。与高压蒸气灭菌法相比，该法不会改变那些在高压蒸气灭菌中不稳定物质，但是也有些明显的缺点

组织培养时各种灭菌特点

常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热（烘烧和灼烧）、湿热（常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波）、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。一、培养基用湿热灭菌培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加

细胞爬片、甩片的制备

(一)细胞爬片的制备 (1)如果使用载玻片或盖玻片，必须在使用之前灭菌。可以一次灭菌并贮存在无菌状态下。如果使用少量的盖玻片，用金属镊子夹住盖玻片，在70%乙醇中浸泡，然后在火焰上烤干。要轻轻地镊取，以防破裂。为了方便起见，可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中，使用时放在火焰上处理。如果使用的盖玻片或载玻片数量较多，可以将它们放于专用的金属支架上，然后高压消毒。如果需要的数量更大，则可将其放在耐热的容器中，干烤2小时。 (2)在无菌状态下，把干燥的玻片放于适当的培养皿中。盖玻片