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—20℃,避光
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6个月
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100
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上海古朵生物有限公司
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10ml
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文献和实验备用(在棕色瓶中4℃可保存两周)。 (2)电极液:阳极1mol/L磷酸(H3PO4):原磷酸试剂的浓度约为16mol/L,故配制时用重蒸水稀释16倍即可。 阴极 1mol/L氢氧化钠(NaOH):称取4g固体溶于100ml重蒸水中。 (3)固定液:甲醇35ml,三氯乙酸10g,磺基水杨酸3.5g加水定容到100ml。 (4)染色液:乙醇35ml,冰乙酸10ml,考马氏亮蓝R2500.1g加水定容到100ml,溶解后过滤备用。 (5)脱色液:乙醇25ml,冰乙酸10ml,加水
的时候出问题了 细胞估计已经破裂 固定时候应该缓慢添加固定液 有的时候固定液就是用PBS和无水乙醇配置的。 Fasta921 我做的步骤:接种适当浓度细胞于培养皿中,培养过夜后,经0.25%胰蛋白酶消化,冷磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后离心,用70%(体积分数)预冷乙醇悬浮细胞于-20度固定过夜后,离心收集细胞,用PBS洗3次去除乙醇,细胞团重悬于PBS中,用20 μg/ml含RNaseA的碘化丙啶PI染色液避光染色30 min,经100目尼龙
标的最常用固定剂。甲醛介导的组织固定被认为依赖于蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸交联的形成,这些交联涉及亚甲基桥(-CH₂- )。甲醛可以化学连接氨基(NH₂ )和肽键(CONH)、氨基(NH)和氨基(NH)或氨基(NH)和氨基( NH₂ )。 甲醛是大多数免疫组化/免疫细胞化学应用中的良好选择,但并非万能固定剂。甲醛过度固定会改变表位中的氨基酸,从而阻碍抗体与其结合。然而,在大多数情况下,可以通过抗原修复技术暴露表位,恢复抗体结合。在这种情况下,冰冷的无水甲醇或无水乙醇是合适的替代固定剂。 注
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