N+尼龙膜[30cm*3m 0.45u]

转膜实验原理与操作步骤

，即可固定DNA 。 3. 转移缓冲液( transfer buffer )的选择： 带正电荷的尼龙膜：可用高盐离子强度( SSC )，但不能充分发挥膜潜能; 0.4N NaOH ，共价结合DNA 是最大优点。 硝酸纤维膜：高盐离子强度促进DNA 与膜结合( 20 × SSC )，低盐离子强度导致小片段DNA 在转移过程中丢失， pH>9 ，DNA 不能与膜结合。 4. 转膜时间( duration of transfer )约 12 hrs

Northern Blotting反应

）； 5×SSC; blocking reagent, 2% （w/v）；N-lauroylsarcosine, 0.1% （w/v）； SDS, 0.02% （w/v）]3MM 滤纸；2×SSC, 0.1% SDS;0.1×SSC, 0.1% SDS方法步骤：1） RNA 转印步骤结束后，移除电泳胶上的吸水纸与3M 滤纸。2） 把尼龙膜连同电泳胶一齐移置于干净卫生纸上，并请小心维持电泳胶与尼龙膜的相对位置。3） 以防水笔在尼龙膜上标出电泳胶样本孔的位置，并以剪刀剪掉尼龙膜左上角，以便标记电泳胶的左右

我作NORTHERN的心得

，用0.01N的 NaOH和3M NaCl洗涤15min×2次； 6）用真空转移器把RNA从胶上转移至膜上，以0.01N的 NaOH和3M NaCl为转移缓冲液。 10cmHg，3 hr； （注：连好真空泵后应该实验一下，然后在放置凝胶，凝胶比较软，应该果断的把凝胶取出，并且反转一下，利于转膜，不能有气泡，应该用玻璃棒轻轻赶出，液面始终高于凝胶才有效，避免加样孔接触尼龙膜边缘，不利于抽真空，把凝胶取出后应该用含有溴乙啶的溶液浸泡，观察转膜效果）- 7）烘烤膜：120℃ 30分钟 （或将膜RNA