游离脂肪酸微量测定试剂盒说明书

游离脂肪酸微量测定试剂盒说明书
FFA (HY-60053) KIT
游离脂肪酸(free fatty acids, FFA)通常指血液中10碳以上的非酯化脂肪酸。正常血清中18碳的油酸占54%，16碳的软脂酸占34%，18碳的硬脂酸6%，另外还有少量12碳的月桂酸、14碳的肉豆蔻酸和20碳的花生四烯酸。血中游离脂肪酸与白蛋白结合，是一种简单的脂蛋白。其主要来源为，从消化道吸收入血；脂蛋白脂酶水解脂蛋白复合物中的甘油三酯或胆固醇酯；脂肪细胞内的脂酶水解储存的甘油三酯。FFA是机体的主要能量物质，其浓度与能量代谢如脂代谢和糖代谢以及内分泌机能密切相关。游离脂肪酸浓度增加是饥饿的生理反应，但也参与肥胖、高脂血症、动脉粥样硬化、糖尿病胰岛素抵抗等代谢综合征病理进程。游离脂肪酸是临床和基础研究中常用的检测指标。试剂盒采用改良比色法测定游离脂肪酸，经抽提和铜皂化，显色反应，用721分光光度计测定550nm光密度进行比色定量。经典方法需要较大量的(0.2ml)血清样品，灵敏度低，重复性差，铜试剂稳定性差须新鲜配制。
游离脂肪酸微量测定试剂盒说明书测定原理：先将血清中的游离脂肪酸经过有机溶剂萃取，用含有FFA的有机液与铜试剂反应，生成有颜色的络合物，颜色深浅与浓度成正相关，因而用比色法测定FFA的含量。
试剂盒组成：
试剂1：抽提液 1瓶
试剂2：铜试剂 1瓶
试剂3：显色剂 1瓶
试剂4：标准品 1瓶
操作步骤：
游离脂肪酸操作步骤 单位（ul）
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样本 标准管
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样本 50 ——
标准品 —— 50
试剂1 600 600
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振荡30秒，充分混匀，室温放置10分钟，3000转，离心5分钟，取上清液
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试剂2 150 150
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振荡30秒，充分混匀，室温放置10分钟，3000转，离心5分钟，取上层液
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上层液 500 500
试剂3 200 200
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充分混匀后，室温孵育5分钟，波长550nm，用酶标仪读取OD值

游离脂肪酸微量测定试剂盒说明书计算结果
有半自动和全自动生化仪的直接定标，空白调零，在机器上直接读取结果。
没有分光光度计的，将标准品用缓冲液（R1）进行倍比稀释后在分光光度计上读取OD值，将未知标本的OD值在曲线上查出对应的浓度值。
也可用酶标仪直接读取数据
正常参考值：
各实验室应建立自己的正常值，下列正常参考值仅供参考：
人：0.2-0.6mmol/L
因为定标扩大100倍，所以结果除以100
注意事项：
1、反应对铜离子及其敏感。至关重要的是，保证抽取步骤使用的试管和吸头与反应步骤使用的试管和吸头的化学隔离，避免有铜剂污染的测定失败。如果曾经接触过铜试剂的试管必须重复使用，应先泡酸或浸泡在去污剂中过夜，然后用大量清水冲洗，最后用蒸馏水清洗2遍。
2、本法在室温（22-25℃）内完成。
3、本产品仅用于体外诊断，避免直接接触皮 肤和眼睛，切勿吞咽。
4、 本产品应在2~8℃避光贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
游离脂肪酸微量测定试剂盒说明书本试剂盒主要技术参数
灵敏度：＜0.25 umol/L
线性范围2.5-2000 µmol/L.
本实验回收系数：96.7%~99.43%
变异系数： 0.73%~2.06%