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- 2026年01月01日
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帕博丽珠单抗（Keytruda）——结构序列分析验证
- 提供商：
北京农业生物检测中心
帕博丽珠单抗（Keytruda）——结构序列分析验证
——抗体，蛋白，多肽N端测序
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公司技术服务项目汇总
| 项 目 名 称 | 单 价 | 备 注 |
| N末端测序（Edman） | —— | 活性,多肽,蛋白等 |
| N/C端测序（质谱法） | —— | 抗体，新蛋白等 |
| 全序列测定（Edman） | —— | 抗体，新蛋白等 |
| 全序列测定（质谱法） | —— | 抗体，新蛋白等 |
| 蛋白多肽全组分鉴定 | —— | 多肽，蛋白等 |
| 二硫键+Cys定位分析 | —— | 定位，数量分析 |
| 氨基酸定性定量分析 | —— | 20种或50种氨基酸 |
| 糖基化修饰分析(N糖) | —— | 修饰位点与数量 |
| 圆二色谱分析 | —— | CD 180-260nm |
| 等电点分析 | —— | 全柱成像毛细管电泳 |
| HPLC分析（多种技术） | —— | RPC,SEC,IEC,HIC,AC |
| HPLC制备（多种技术） | —— | 半制备柱 |
| 电泳制备转膜 | —— | 还原电泳 |
| 焦谷氨酸肽酶去Q环化 | —— | N端Q环化修饰 |
| 其他前处理————浓缩，脱盐，酸化处理，烷基化，酸水解等 | ||
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项目1 ：蛋白质/多肽/抗体的N端序列分析
Edman法N末端序列分析
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检测仪器: （总计4台套）
岛津 PPSQ-53A 蛋白多肽自动测序仪（1#）
岛津 PPSQ-33A 蛋白多肽自动测序仪（2#）
岛津 PPSQ-33A 蛋白多肽自动测序仪（3#）
岛津 PPSQ-31B 蛋白多肽自动测序仪（4#）
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主要应用:
1、抗体药物申报：抗体的 N 末端氨基酸序列情况判断
2、全序列测定：N末端连续 70 个以上氨基酸序列测定
3、应用领域：药物申报，生物药研发，海关检验，食品药品监测
4、其它应用：结构验证，酶切位点寻找，断点寻找，环化与否，半胱氨酸，二硫键判断，活性区域
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样品要求:
1、含量: 200 -1000 Pmol (15个AA--70个AA)
2、形式: PVDF膜；液体；干粉
3、封闭: N端未被封闭(如Q修饰，N端环化，甲酰化，乙酰化等)
4、干扰: 不能含有蛋白酶，氨基酸，胺，盐分，去污剂等
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提供信息:
1、样品来源: 表达重组，天然，合成等
2、样品含量: 浓度，含量（或者紫外吸收情况）
3、样品纯度：SDS或者HPLC及质谱图谱
4、制备方式: 简单提取流程，各步骤结果及图谱
5、样品溶解性：常规溶剂，难溶溶剂
6、其他:稳定性，毒性，腐蚀性；可能杂质，预测结构，分子量等
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项目2： 蛋白质/多肽等大分子的质谱分析
蛋白质、多肽、抗体等生物分子的质谱鉴定测序分子量等
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检测仪器:
基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪 MALDI-TOF-TOF
高性能定性定量质谱仪 AB Sciex Triple TOF 5600+
电喷雾组合型离子阱质谱仪 Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap™ MS
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检测对象:
1、抗体,融合蛋白质
2、合成小肽，天然活性小肽
3、酶解后的肽片段
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检测项目：
1、分子量精确测定； 6、二硫键定位检测
2、高通量蛋白鉴定； 7、半胱氨酸检测
3、 N 端序列测定； 8、肽段覆盖率
4、 C 端序列测定； 9、肽质量指纹图谱
5、多肽全序列测定；
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样品要求:
1、样品含量:50-1000 Pmol (根据检测项目而定)
2、样品形式:液体，干粉，胶粒/条带
3、纯度要求：95%以上
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客户提供信息:
1、来源: 天然,合成,表达(及其理论序列)
2、含量: 浓度,含量（或者紫外吸收情况）
3、溶解性：常规溶剂,难溶溶剂
4、特征：分子量,等电点,可能杂质,可能修饰,可能结构等
5、制备方式: 简单提取流程（SDS；HPLC；酶解；其他）
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项目3： 蛋白质/多肽的液相分离纯化
蛋白质、多肽、抗体等生物分子的分离纯化制备
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使用仪器:
快速蛋白纯化系统 ÄKTA Avant 25
快速蛋白纯化系统 ÄKTA Explorer100
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纯化对象:
1、天然蛋白质/多肽等
2、合成多肽/小肽等
3、具有活性的天然提取混合物
4、带标签的融合蛋白，抗体等
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纯化技术与条件：
1、离子交换——HiTrap HP柱,Mono柱,含Q,DEAE,ANX,S,SP,CM等填料
2、凝胶层析——Superdex 30/75/200柱，Hiprep 30/75/200柱等
3、亲和层析——His标签柱，GST标签柱，含分析制备级别
4、疏水层析——Phenyl，Butyl，Octyl各种填料柱子
5、反相层析——C3，C4，C8，C18各种填料的柱子
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样品要求:
1、样品含量:足量（根据后期研究需求而定）
2、样品形式:液体；干粉
3、室温稳定性好
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客户提供信息:
1、样品来源: 动物、植物、微生物；天然，合成或表达等
2、样品含量: 浓度，含量（或者紫外吸收情况）
3、样品溶解性：常规溶剂，难溶溶剂
4、目标物分子量，等电点，活性情况
5、制备方式: 简单提取流程，SDS或者LC及图谱
6、其他信息:稳定性，毒性，腐蚀性；可能杂质，预测结构等
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项目4： 高效液相色谱分析（HPLC）
蛋白质、多肽、代谢物等生物分子的HPLC分析
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检测仪器:
安捷伦高效液相 Agilent 1200 HPLC
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主要应用:
1、蛋白质/多肽的纯度鉴定
2、蛋白质/多肽的定量分析
3、天然/合成样品的纯度检测
4、蛋白质/多肽的指纹图谱分析
5、单糖/寡糖/多糖定性定量分析
6、混合物/粗提物分子量分布分析
7、代谢组分/小分子指纹图谱分析
8、蛋白/多肽/糖类的少量纯化制备
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样品要求:
1、样品含量: 50 Pmol-1000 Mmol (从ng分析到g级制备)
2、样品形式: 液体或干粉；纯品或混合物；
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客户提供信息:
1、样品来源: 表达，天然，合成；动物、植物、微生物等
2、样品含量: 浓度，含量（或者紫外吸收情况）
3、提取方式: 简单提取流程，各步骤结果及图谱
4、样品溶解性：常规溶剂，难溶溶剂
5、其他:稳定性，毒性，腐蚀性；可能杂质，预测结构，分子量等
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文献和实验1、Activation of sodium channel by a novel-scorpion toxin, BmK NT2, stimulates ERK1/2 and CERB phosphorylation through a Ca2+ dependent pathway in neocortical neurons
下载连接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28591591
2、Cryo-EM structures of MERS-CoV and SARS-CoV spike glycoproteins reveal the dynamic receptor binding domains
下载连接：https://www.nature.com/articles/ncomms15092/
3、Activation of Aedes aegypti prophenoloxidase-3 and its role in the immune response against entomopathogenic fungi
下载连接：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/imb.12318
4、Chemosynthesis and characterization of site-specific N-terminally PEGylated Alpha-momorcharin as a potential agent
下载连接：https://www.nature.com/articles/s41598-018-35969-1
Science：直击肿瘤命门，Shibin Zhou 等开发靶向 TP53 突变的双特异性抗体
是否存在交叉反应，评估其安全性，研究人员基于抗体结构对可能的交叉反应表位进行了检测和验证。结果显示，H2-scDb 的特异性非常好，并不会诱导交叉反应。 图片来源：Science 最后，研究人员在小鼠模型中进行了体内实验的验证，再次证明了 H2-scDb 可以特异性识别和激活 T 细胞，发挥良好的抗肿瘤作用。 图片来源：Science 研究意义：研究团队已经证明，他们研发的这一双特异性单链抗体 H2-scDb 可以特异性识别和激活 T 细胞，发挥抗肿瘤做用，且不会诱导产生交叉反应，具有良好的安全
），需要用有特定甲基化背景（dam-/dcm-）菌株扩增得到的质粒才能切割，等等，（此处省略若干连载）。 酶界之“求同存异，合作共赢” 只要“切削补”得到平末端，都能凑一起 终于盘算好能让目标片段和载体牵手了，你还得要检查一下这一轮操作插入载体后，在目标基因 ATG 前面会不会意外引入终止密码、或者不同编码框的 ATG ——提前终止或者密码“三观不一致”都可能影响后续的表达。筛选时需要有可靠的方法来验证目标片段大小是否正确、“正向插入”还是“反向插入”。有时还需要考虑 ATG 距离启动子后 SD
可接受值）、0.70～0.80（相当好）、0.80～0.90（非常好） 若分量表的内部一致性系数在 0.60 以下或者总量表的信度系数在 0.80 以下，应考虑重新修订量表或增删题项。 图 5：自制问卷调查结果 （图片来源：风云） 五、效度分析 效度分析指尺度量表达到测量指标准确程度的分析。 方法如下： ☆ 探索性因子分析 主要是为了找出影响观测变量的因子个数，以及各个因子和各个观测变量之间的相关程度，以试图揭示一套相对比较大的变量的内在结构。 ☆ 验证性因子分析 建立在研究者已经对所研究
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