人外周血淋巴细胞分离液TBD LTS1077 200ml

用于基因芯片分析的血液样品的准备

由于血液中的红细胞没有细胞核，用于基因表达分析时，往往是分析血液中白细胞的基因表达情况。因此首先需要把血液中的白细胞进行分离。下面方法是我们实验室摸索的适合基因芯片技术白细胞分离的过程。一、实验材料：淋巴细胞分离液（天津TBD生物技术发展中心）；灭菌生理盐水（普通0.9%生理盐水灭菌即可）；Trizol试剂（Invitrogen公司）各种取样器具高温灭菌即可；仪器设备：带水平转头的离心机，具体过程：以2 ml全血为例1、将2 mL抗凝血（肝素或者EDTA盐抗凝都可），以3,500 转/分，离心

人PBMC分离和培养

1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理 2、按血：分离液＝1：2注入国产淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会： 1、实验中我用过肝素方法抗凝，但效果不好，因为肝素抗凝后交接层混浊，洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂，效果very good 2、实验用的是国产淋巴细胞液（天津TBD），没有用过进口

细胞密度梯度分离介质Ficoll：人外周血单个核细胞的分离

Ficoll：一种已灭菌的，特定密度的密度梯度离心介质。被广泛用作从外周血、骨髓及脐带血中分离高活性的单个核细胞。 Ficoll-Paque溶液包含： Ficoll PM400：由高分子量蔗糖（Mr 400K）聚合物与表氯醇聚合合成(凝集红细胞) 泛影酸钠：使溶液在低粘度下具有高密度 EDTA二钠钙 Ficoll的保存：开盖前保存在4℃~30℃（避光），开盖后保存在 4℃~8℃（避光） Ficoll 产品细分如下： 使用Ficoll (1.077g/ml) 分离人外周血