M199/EBSS液体培养基

脐静脉内皮细胞原代培养

收集足月顺产或剖腹产新生儿脐带，保存于5%糖盐水中，4℃。脐带在4℃ 5%糖盐水中保存时间不超过24h。在超净工作台上将脐带取出，置灭菌弯盘中，用生理盐水冲洗脐静脉至冲出的液体不含红细胞。钳闭脐带一端，从另一端向脐静脉内注入37℃预热的0.25%胰蛋白酶，钳闭另一端。置37℃的生理盐水中10~15min。取出脐带，松开一端钳子，放出消化液，加入含15%新生小牛血清的M199培养基[含有85ml M199培养基(1000ml M199培养基，0.292g谷氨酰胺，3.0g Hepes ，2.0g

干货：外泌体的细胞摄取实验报告

液，用 PBS 清洗细胞 3 次 使用 4% 多聚甲醛在室温下固定 15 min 后观察细胞形态 弃去 4% 多聚甲醛，用 PBS 清洗细胞 3 次，每次 5 min （不透化）加入 1% Triton X-100 透化 5 min 后用 PBS 清洗细胞 3 次 配制所需染色工作液体积 加入 300μL 色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞 37℃ 避光孵育细胞 30 min。 吸除染色工作液，再用 PBS 洗涤 3 次，每次 5 min 取出细胞爬片，用含 DAPI 封片剂进行封片 激光

酵母双杂交实验常见问题及其解决方法

1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办? 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1 ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30 ℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5 ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 2.如果诱饵蛋白能直接激活报告