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大量
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钰博生物
- 检测范围:
见说明书
- 检测方法:
酶联免疫
- 应用:
科研
- 标记物:
见说明书
- 样本:
血清/组织/尿液
促胰液素放免试剂盒操作说明书
Secretin(HY-10241) RIA KIT
促胰液素(secretin)是第一种被发现的激素。为一种碱性多肽。由27个氨基酸残基组成,含11种不同氨基酸。贝利斯与斯塔林(Bayliss与Starling)等于1902年发现。产生促胰液素的细胞为“S”细胞,主要在十二指肠粘膜,少量分布在空肠、回肠和胃窦。近来已在脑中提纯,因此亦加入脑-肠肽行列。作用为刺激胰腺分泌大量含丰富碳酸氢盐的胰液,对胰酶分泌有弱的加强作用,但如与促胰酶素一起给予,则明显增加促胰酶素分泌。
标本采集:采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml(含150 IU以上)和10%EDTA.Na2 30uL,采血后立即置冰中,30分钟内4℃下2000转/分,离心15分钟取血浆置-20℃待测,可保存3-6个月。
药盒组成:
1、Secretin抗体一瓶。 2、125I- secretin标记一瓶。
3、缓冲液一瓶。 4、分离剂(第二抗体)一瓶。
6、secretin标准品5瓶浓度为:0.5、 1.2、 2.5、 10、 50 pmol/L
促胰液素放免试剂盒操作说明书测定方法:
Secretin ¬ RIA 操作程序 (单位:ul)
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试 剂 T NSB S0 S1~S10 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I- SEC 100 100 100 100 100
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摇匀,4℃ 24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温放置20分钟,4℃3500转/分 离心15分钟,去上清,测定沉淀cpm值。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.
促胰液素放免试剂盒操作说明书注意事项:
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
测定前,血浆标本推荐过C18拄。
附:血浆标本过柱步骤:
1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分 离心20分钟,取上清。
2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
7、取干燥后的西林瓶用500 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实验
时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种
试剂(或材料)。
正常参考值:1.0-3.1pmol/L
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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文献和实验高效转染试剂盒说明书.pdf 关于百恩维生物
,不能得到足够的菌量来抽提质粒,摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型,导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多:容易导致裂解不充分,且容易超过硅胶膜柱的承载上限,最终使得质粒提取效率降低,建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当:比如在加入缓冲液重悬菌体时,菌体没有充分分散悬浮,导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解,可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂(QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂),均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用
CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting
%;2. 72 h 后收集细胞提取基因组 DNA(按照基因组 DNA 提取试剂盒的说明书操作);3. 使用事先设计好的引物进行 PCR 扩增,这里使用的酶是 NEB 公司的 Q5 high-fidelity Polymerase,一切按照该酶的说明书严格操作;4. 将目的条带切割下来并使用胶回收试剂盒回收 DNA 条带,一切按照胶回收试剂盒说明书进行操作;5. 回收后的 DNA 样本,经 T7 Endonuclease I 酶解验证错配 DNA,部分结果如下:T7 EI验证成功,开始正式实验时间飞逝,上次说
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