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促胰液素放免试剂盒操作说明书

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  • YB-10241
  • 2025年07月07日
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      钰博生物

    • 检测范围

      见说明书

    • 检测方法

      酶联免疫

    • 应用

      科研

    • 标记物

      见说明书

    • 样本

      血清/组织/尿液

    促胰液素放免试剂盒操作说明书
    Secretin(HY-10241) RIA KIT
    促胰液素(secretin)是第一种被发现的激素。为一种碱性多肽。由27个氨基酸残基组成,含11种不同氨基酸。贝利斯与斯塔林(Bayliss与Starling)等于1902年发现。产生促胰液素的细胞为“S”细胞,主要在十二指肠粘膜,少量分布在空肠、回肠和胃窦。近来已在脑中提纯,因此亦加入脑-肠肽行列。作用为刺激胰腺分泌大量含丰富碳酸氢盐的胰液,对胰酶分泌有弱的加强作用,但如与促胰酶素一起给予,则明显增加促胰酶素分泌。
    标本采集:采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml(含150 IU以上)和10%EDTA.Na2 30uL,采血后立即置冰中,30分钟内4℃下2000转/分,离心15分钟取血浆置-20℃待测,可保存3-6个月。
    药盒组成
    1、Secretin抗体一瓶。 2、125I- secretin标记一瓶。
    3、缓冲液一瓶。 4、分离剂(第二抗体)一瓶。
    6、secretin标准品5瓶浓度为:0.5、 1.2、 2.5、 10、 50 pmol/L
    促胰液素放免试剂盒操作说明书测定方法:
    Secretin ¬ RIA 操作程序 (单位:ul)
    ————————————————————————————
    试 剂 T NSB S0 S1~S10 样 品
    ————————————————————————————
    缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
    标 准 品 —— —— —— 100 ——
    样 品 —— —— —— —— 100
    抗 体 —— —— 100 100 100
    125I- SEC 100 100 100 100 100
    ————————————————————————————
    摇匀,4℃ 24小时
    ————————————————————————————
    分 离 剂 —— 500 500 500 500
    ————————————————————————————
    混匀,室温放置20分钟,4℃3500转/分 离心15分钟,去上清,测定沉淀cpm值。
    结果计算:
    以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.
    促胰液素放免试剂盒操作说明书注意事项:
    本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
    本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
    本月药盒标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
    本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
    测定前,血浆标本推荐过C18拄。
    附:血浆标本过柱步骤:
    1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分 离心20分钟,取上清。
    2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
    3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
    4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
    5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
    6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
    7、取干燥后的西林瓶用500 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实验
    时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
    Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种
    试剂(或材料)。
    正常参考值:1.0-3.1pmol/L
    本月药盒参考数据:
    ————————————————————————————————
    T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
    ————————————————————————————————
    CPM
    ————————————————————————————————
    N/T% B0/T% B/ B0 %
    ————————————————————————————————
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        高效转染试剂说明书.pdf       关于百恩维生物  

    • 实验操作

      ,不能得到足够的菌量来抽提质粒,摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型,导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多:容易导致裂解不充分,且容易超过硅胶膜柱的承载上限,最终使得质粒提取效率降低,建议参考提取试剂建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当:比如在加入缓冲液重悬菌体时,菌体没有充分分散悬浮,导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解,可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂(QIAGEN 质粒提取试剂中均有配备 LyseBlue 指示剂),均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用

    • CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting

      %;2. 72 h 后收集细胞提取基因组 DNA(按照基因组 DNA 提取试剂说明书操作);3. 使用事先设计好的引物进行 PCR 扩增,这里使用的酶是 NEB 公司的 Q5 high-fidelity Polymerase,一切按照该酶的说明书严格操作;4. 将目的条带切割下来并使用胶回收试剂回收 DNA 条带,一切按照胶回收试剂说明书进行操作;5. 回收后的 DNA 样本,经 T7 Endonuclease I 酶解验证错配 DNA,部分结果如下:T7 EI验证成功,开始正式实验时间飞逝,上次说

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