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甲状腺素放免试剂盒操作说明书

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  • 2025年07月16日
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      钰博生物

    • 检测范围

      见说明书

    • 检测方法

      酶联免疫

    • 应用

      科研

    • 标记物

      见说明书

    • 样本

      血清/组织/尿液

    甲状腺素放免试剂盒操作说明书
    T4HY-002 RIA KIT
    甲状腺素(T4)又名一四碘甲状腺原氨酸,分子量为777。T4是甲状腺分泌的主要甲状腺激素之一,T4从甲状腺分泌到血循环后99.5%与甲状腺素结合球蛋白(TBG)、甲状腺素结合前蛋白和白蛋白等结合,其作用使激素防止由肾脏排出体外。T4与三种蛋白质结合的百分率,分别为70%、20%、10%,在血循环中只有0.05%的T4为游离状态(FT4)。T4可以经脱碘酶的作用形成生物活性更强的三碘甲状腺原氨酸(T3)。T4主要功能为调节蛋白质及脂肪的代谢,促进生长发育等。血循环中T4的水平受丘脑—垂体—甲状腺轴系统负反馈机制所调节。由于T4绝大部分与TBG等结合,血中总T4水平必然受血中TBG的影响。为了纠正TBG的影响,联合125I-T3的摄取率测定,计算游离T4指数,将获得有意义的结果。甲状腺疾病是内分泌系统常见的疾病,总T4放射免疫测定是研究甲状腺功能最有效最常用的方法之一。
    药盒组成:
    1、 T4标记(红色)1瓶 。
    2、 T4 抗体1(蓝色)瓶。
    3、 分离剂(第二抗体)一瓶。
    4、 T4标准品6瓶。其浓度分别为:0、20、40、80、160、320ng/ml(即:0、25.74、51.48、102.96、205.92、411.84)。
    以上各组试剂均应摇匀使用。
    甲状腺素放免试剂盒操作说明书操作方法:
    1、样品处理:取晨空腹静脉采血,分离血清。(2-8)℃放置可保存7天,若冰冻保存,可放置四周。脂血或溶血样品影响测定结果。
    1、 实验方法:试管编号,按下表程序操作:
    操作表 ( 单位: ul)
    管 别
    标准管
    样品
    抗血清
    蒸馏水
    125I-T4
    混匀,37℃温育1小时,任取三管测总T(CPM)
    分离剂
    NSB管
    50(S0
    --
    --
    100
    200
    500
    S0
    50
    --
    100
    --
    200
    500
    S1-S
    50
    --
    100
    --
    200
    500
    样品管
    --
    50
    100
    --
    200
    500
    混匀,室温放置15分钟,离心(3500转/分)15分钟,吸弃上清液,测定各管沉淀的放射性计数(CPM)。
    数据处理:
    1、计算机处理:建议函数模型采用三次多项式或log~logit法。
    2、计算、绘图法:
    计算各管的百分结合率:以S0(cpm数)为B0,各标准管Si(cpm数)为Bi,求各管的百分结合率。
    Bi Bi管(cpm)—NSB管(cpm)
    — %= —————————————— ×100
    B0 B0管(cpm)—NSB管(cpm)
    (1)线性回归:用logX~logitY回归,求出r、a、b值,样品含量可由下式计算得出。
    - a+logit Y
    Log X= ————
    b
    (2)绘图法:用各标准点计算的结果,在半对数坐标纸上绘制Bi/B0~logX标准曲线图或在log~logit坐标纸上绘制标准曲线图,未知样品浓度可根据Bi/B0的百分结合率从标准曲线图上查出。
    正常叁考值:
    各实验室应建立自己的正常值,下列正常参考值仅供参考:
    T4(n=150):50~126 ng/mL (64.30~162 .2nmol / L)
    甲状腺素放免试剂盒操作说明书技术特性:
    1、曲线范围:(20~320)ng/Ml (25.74~411.84nmol / L)
    2、灵敏度: < 3ng/mL(3.86nmol / L)
    3、特异性:T4抗血清与T3的交叉反应合格。
    4、精密度:批内CVw<10%,批间CVb<15%
    5、单位换算:(nmol/L)=(ng/Ml)×1.287
    保存及有效期:
    药盒于(2~8)℃避光保存,切勿冻存。自检定合格之日起有效期为45天。
    药盒参考数据:
    指标
    B/T(%)
    Bi/B0(%)
    项目
    NSB
    S0
    S1
    S
    参数
    <5
    ≥55
    80
    15
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    • 实验操作

      ,不能得到足够的菌量来抽提质粒,摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型,导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多:容易导致裂解不充分,且容易超过硅胶膜柱的承载上限,最终使得质粒提取效率降低,建议参考提取试剂建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当:比如在加入缓冲液重悬菌体时,菌体没有充分分散悬浮,导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解,可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂(QIAGEN 质粒提取试剂中均有配备 LyseBlue 指示剂),均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用

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