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文献和实验Ultrasonic, Danbury, CT)。 ( 9 ) NiNTA-琼脂糖(NTA:nickel- nitrilotri-acetic acid,镍-三乙酸基氨,Qiagen)。 ( 10 ) 1 ml 聚丙烯柱(Qiagen, Hilden,Germany) 。 ( 11 ) Bradford 试剂(Bio- Rad, Munich, Germany) 。 2.2 蛋白质芯片上的激酶检测 ( 1 ) TBS + Tween ( TBST ):10 mmol/L Tris
)茎杆序列中G和C的含量不能太高5’-端的第一个碱基最好不要选择G由于被测对象DNA或RNA是大分子,存在扭曲现象,因此要选择被测对象的外围碱基序列,即容易接近的那段序列来设计信标。荧光猝灭依赖的是能量共振转移,而转移的效率与荧光基团发射光谱同猝灭基团激发光谱的完全重叠有关。为了荧光能有效猝灭,荧光基团的发射光谱应完全覆盖猝灭基团激发光谱。符合此要求且较常用的荧光剂-淬灭剂有:EDANS(5′- (2′-氨乙基氨基奈-1-磺酸)和DABCYL(4′-(4′-二甲基氨基叠氮苯) 苯甲酸 6-荧
,pH 7.0。 ( 16 ) 4 ml Ni-氨基三乙酸(NTA) 柱子:4 ml Ni-NTA 高流速介质(Qiagen)。 ( 17 ) 咪唑缓冲液:50 mmol/L 磷酸钠、0.25 mol/L 咪唑、50 mmol/L NaCl,pH 7.0。 ( 18 ) 磷酸缓冲液:50 mmol/L 磷酸钠、150 mmol/L NaCl,pH 7.2。 ( 19 ) EDTA。 ( 20 ) 1 ml 苯氯仿 HR 5/5 柱子(Amersham
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