未染Marker

流式课堂 | 流式实验对照设置之单阳对照

一致； ②单阳管和全染管的样本处理要相同，如：全染管进行了固定破膜处理，单阳管即使是表面因子，也需要进行固定破膜； ③单阳管上机的电压要和全染管保持一致； ④单阳管要保证有足够的阳性细胞群。 C. 单阳对照常见问题 问：目标 marker 表达量高，阴阳细胞分群明显，也需要设置单阳管吗？ 答：如果 panel 的指标少，可以不用设单阳管，通过手动调节补偿，将细胞调整到横平竖直的状态即可。但是，如果 panel 的指标比较多，就必须都设置单阳管。 补偿前 ↓ 补偿后 ↓ 图示：FITC 和 PE 之间

流式课堂 | 流式对照设置之同型对照

蛋白分子 以 CD45＋白细胞样本为例，在排除了死细胞和粘连体后，未进行染色、也未进行 Fc 受体阻断的空白样本，各通道荧光处于低水平。如图所示： 染同型对照后，背景荧光增强。 针对这种因 FcR 导致的强背景，建议可以添加 FcR 封闭剂，如下图所示： 阻断 FcR 后，染同型对照，背景荧光恢复到与空白相似。 #03 什么时候需要做同型对照？ （1）对于阴阳性分群明显的指标，不需要同型对照即可设门，例如 CD3、CD4、CD8 等用于 T 细胞的检测指标。对于阴阳性分群不清楚的指标，例如 CD25、CD

流式实验如何配色？

第一步、根据实验目的，选择目标 Marker。 通过阅读相关文献，了解您实验需要选择哪些 Marker，以及这些 Marker 之间的逻辑关系（圈门的父子关系，比如 T 细胞CD3 是「父」，而 CD4 或者 CD8 就是子」）。 这里列举了一些常见的细胞标志 Marker： 第二步、确认 Marker 的表达位置。 对于细胞质或者细胞核的 Marker，需要对细胞进行固定破膜/破核膜。在做胞质或胞核 Marker 染色实验操作时，需要先染细胞表面 Marker