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- 详细信息
- 文献和实验
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- 宿主:
Mouse
- 适应物种:
Human
- 克隆性:
单克隆
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文献和实验TBS 和 5% NGS 中封闭样品。市售的含有酪蛋白的封闭溶液与磷酸化的一抗结合后易减弱信号;因此,我们建议不使用含有酪蛋白的封闭剂进行磷酸化特异性抗体的检测。以上针对封闭步骤所提建议均是在以 SignalStain. Boost IHC Detection Reagent 作为检测试剂的情况下提出的。如果选择使用其他检测试剂,我们则建议使用与二抗来源相同的血清进行封闭。抗体:Phospho–Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb #9718样本:石蜡
:单克隆抗体设立相应亚型的对照,而多克隆抗体需要对应种属的 IgG 作为对照。用血球计数法或是其他方法对细胞计数。 1. 将 0.5-1 x 106 个细胞分到各检测管中(依照体积)。 2. 各管加入 2-3 ml 孵育缓冲液漂洗,离心回收细胞。重复一次。 3. 将每个管中的细胞重悬在 100 µl 孵育缓冲液中。 4. 室温,孵育缓冲液封闭 10 分钟。 5. 按合适的稀释比例在检测管中加入未标记,生物素标记或是荧光素标记的一抗。具体的用量参考抗体各自的说明书。
而言。 通常情况下,一抗可以在山羊、小鼠、兔子、大鼠及绵羊体内制备,其中属小鼠及兔子最为常见,相应的,二抗的种属也应当与一抗的相一致。而对于制备二抗的宿主,则应选择另外一种不同的动物,一般选用驴、山羊、兔子、绵羊或其他较大的动物,可以实现二抗的大规模制备,其中又属山羊使用最多。 对于二抗类别或亚类的选择,应遵循与一抗类别或亚类相一致的原则,其中anti-IgG使用最多。这可能是因为除了五种类别的单克隆抗体外,很多一抗是多克隆抗体,属于IgG类免疫
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