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NA
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Mouse
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单克隆
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文献和实验展 1 转录起始的控制 1.1 rna聚合酶 转录其实是基因转录 的关键控制点,而关键的作用酶正是RNA聚合酶。RNA聚合酶是一类大分子蛋白质,是一个由8-14个亚基组成的复合物,其分子质量在500kDa以上。在哺乳动物的细胞中,转录通过三种RNA聚合酶中的一种得以实现,而每一种RNA聚合酶都具有不同的特征。 (1)RNA聚合酶 I转录rRNA,位于核仁,主要负责50~70%的RNA聚合酶活性; (2)RNA聚合酶II合成核外RNA,位于核浆,主要
;残留的 RNase 极易将模板 RNA 降解掉。 逆转录酶: 1、目前商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的 Moloney 鼠白血病病毒反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的鼠白血病病毒(MLV)反转录酶。AMV 反转录酶包括两个具有若干种酶活性的多肽亚基,这些活性包括依赖于 RNA 的 DNA 合成,依赖于 DNA 的 DNA 合成以及对 DNA:RNA 杂交体的 RNA 部分进行内切降解(RNA 酶H活性)。MLV 反转录酶只有单个多肽亚基
:RNA杂交体的RNA部分进行内切降解(RNA酶H活性)。MLV反转录酶只有单个多肽亚基,兼备依赖于RNA和依赖于DNA的DNA合成活性,但降解RNADNA杂交体中的RNA的能力较弱,且对热的稳定性较AMV反转录酶差。2、普通逆转录酶反应温度为37-42度,然而一些有丰富二级结构的复杂模板或者高GC含量的模板在常温下扩增困难,需要将逆转录反应置于较高温度下进行改善扩增。对于较高的反应温度,建议使用cMASTER-RT酶,该酶在37-60度的温度范围内都能保持良好的活性,使用cMASTER-RT
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