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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
现询客服
- 英文名:
SYBR Green I(PCR级,10000X)
- 库存:
大量
- 供应商:
solarbio
- 规格:
50ul/100ul/1ml
| 规格: | 50ul | 产品价格: | ¥400.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100ul | 产品价格: | ¥700.0 |
| 规格: | 1ml | 产品价格: | ¥5500.0 |
2 货号:SR4110
3 规格:50/100ul
4 保存:-20℃避光保存,有效期至少一年。
5 产品说明:
SYBR Green I 染料是一种直接与双链DNA (dsDNA) 结合的荧光染料,是荧光定量PCR 最常用的DNA结合染料。在定量PCR中,SYBR Green I可与双链DNA(dsDNA)非特异性结合后发出荧光,则可以通过检测反应体系中的SYBR Green I 荧光强度,达到检测PCR 产物扩增量的目的。游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,一旦与dsDNA 结合,其荧光增加1000 倍,一个反应发出的全部荧光信号与出现的dsDNA 量成比例,且会随扩增产物的增加而增加;所以通过检测PCR 反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的DNA 片段的熔解温度。
6 使⽤说明:
使用时,配置PCR反应混合液,将10000×SYBR Green I浓缩液加入到PCR反应体系,使终浓度为0.5× (0.2×到1×之间调整)。以上操作建议在冰上进行。
注:① 反应液配制方法和PCR 扩增条件请参照DNA 聚合酶使用说明。
② Realtime PCR 扩增仪的使用方法,请参照各仪器说明书。
7 注意事项:
使用浓度对荧光PCR结果的影响 SYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低,这就意味着低拷贝的样品可能无法检出;而在高浓度时,将会抑制PCR反应,降低PCR 反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度,反应的终浓度为0.2×到1×之间。
镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR
反应时,镁离子浓度比无SYBR Green I 的普通PCR 反应高出0.5~3mM。
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
the relative values for your gene of interest’s change in expression. SYBR qPCR Quick Protocol StandardsØ Dilute the cDNA ~4-fold (e.g. 21μl sample + 59μl H2 O = 80μl)Ø Pool an appropriate amount from each sample to create standard 1 (i.e. 30μl x
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度,需要摸索,从200nM到700nm等,设置不同浓度。3、每个引物浓度,从well 1到12设置4个样本,阳性cDNA 1和2,NTC以及H2O,做triplicate。4、若用ABI7000或7700,所有的PCR条件可设置成一致的,减少麻烦,当然,引物
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