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- 信裕生物
- XY0636
- 中国
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
SYBR Green I (10000×) 电泳用
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃，避光保存。
- 规格：
50μL
SYBR Green I 与双链 DNA 的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等）没有抑制作用。另外，SYBR Green I 与 EB相比，诱变能力大大降低。
使用方法：
注意：染料使用前应在室温下彻底融化混匀后使用。
SYBR Green I 后染方法 （推荐方法）
1. 制作不含染料的凝胶，按照常规方法进行电泳。
2. 用 pH 7.0 - 8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或 TE），按照 10000：1 的比例稀释 SYBR GreenⅠ浓缩液（如 50ml 1×TAE 中加入 5μl 染料），混匀，制成染色溶液。
注：如要染色 RNA ，按照 5000 ：1 比例稀释。
3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔盖住容器使染料避光。室温振荡染色 10-30 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。
4. 紫外灯下观测。
SYBR Green I 预染方法
1. 6×SYBR loading buffer 预染液的配制：
| 10000×SYBR浓缩液 | 6μl | 6μl |
| 10×DNA loading buffer | 0.6ml | - |
| 6×DNA loading buffer | - | |
| 1×TE pH8.0 | 0.4ml | 1.0ml |
| 6×SYBR loading buffer预染液 | 1.0ml | 1.0ml |
6×SYBR loading buffer 预染液避光 2-8℃可以放置一个月以上。
2. 制胶：按常规方法制备凝胶，凝胶温度降至 60℃左右时加入 10000×SYBR，使染料终浓度为 1×，如 40ml 凝胶溶液中加入 4μl 染料。
注：如要染色 RNA ，使染料终浓度为 2 ×（如 40ml 凝胶溶液中加入 8μl 染料）。
3. 样品预染：取 1-2μl 6×SYBR loading buffer 预染液与电泳样品和 Marker 混合，室温预染3-5 分钟。
4. 上样、电泳后紫外灯下观察。
使用注意事项
1．后染方法是推荐方法，能得到更好的电泳结果；由于 SYBR 对样品过量非常敏感，预染方法容易出现条带扭曲变形（建议泳道中每条带的含量不要超过 5ng），请根据实际情况摸索出适合自己的实验程序，
2. SRBR 对电泳缓冲液的 pH 要求严格，有效 pH 为 7.5-8.0，电泳时尽量使用新鲜配制的缓冲液，并保证合适的 pH 范围。
3. SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
4. 使用酒精沉淀核酸中，SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉。
5. 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blot，建议在预杂交和杂交溶液中加入0.1%- 0.3% 的 SDS，可以有效去除 SYBR。
6. 在紫外下观察，与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA 则颜色为橘黄。
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文献和实验染料。 （2） 按照常规方法进行电泳即可。 u 注：此方法染色可以准确确定片段分子量，用量相对较少。1mL染料大约可以做300块100mL的胶。 2．点染法 （见图3） （1） 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。 （2） 工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SUPER Green Ⅰ稀释100倍，即为SUPER Green Ⅰ工作液。SUPER Green Ⅰ工作液可以置2～8℃保存一个月以上。 （3） 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引物浓度，从well 1到12设置4个样本，阳性cDNA 1和2，NTC以及H2O，做triplicate。4、若用ABI7000或7700，所有的PCR条件可设置成一致的，减少麻烦，当然，引物
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