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DyNAmo SYBR Green Probe Detection
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文献和实验引物对所有的靶位点不产生十分稳定一致的结果,建议使用15nt的随机引物2. oligo-dT:只能用于mRNA完整的样品,特别有polyA .而且对于一些特殊的变异体以及较长的3’UTR的区域比较困难3. 特异引物:最特异最灵敏的方法。特别RNA量足够情况下建议使用此法。PCR 优化PCR优化主要有:1. 引物的浓度2. 建议使用SYBR Green I和EvaGreen 进行扩增和溶解曲线的测试笔者建议的操作流程I.靶的选择和试验设计1. 针对目的基因序列选择合适的扩增片断查看以下三个网站是否
is cDNA concentration 200 ng/ul too high for qRT-PCR-Rea
like to increase the concentration of cDNA to 200 ng/ul but am wondering if this can cause any problems. I use SYBR green. Also, my water blank with reference gene(18S) has a CT value of 32.0. I have run this with DEPC water, and two different bottles
SYBR Green I和EvaGreen 进行扩增和溶解曲线的测试笔者建议的操作流程:I.靶的选择和试验设计1. 针对目的基因序列选择合适的扩增片断查看以下三个网站是否有合适的已经证实的QRT-PCR的扩增引物,探针以及反应条件.RTPrimerDB (http://medgen.ugent.be/rtprimerdb),PrimerBank (http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/index.html)Real Time PCR Primer Sets
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