HRP反应终止缓冲液

ELISA 实验操作要点

本底值增高。OPD 底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD 产物用硫酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。 TMB 受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应边观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB 经 HRP 作用后，约 40 分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至 2 小时后即可完全消退至无色。TMB 的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间（12-24

夹心法 ELISA 操作步骤

体，洗板 5 次，方法同步骤 3。 底物：每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，混匀，加上覆膜，37℃ 避光孵育 15 分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。 终止：每孔加终止液 50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 读值：立即用酶标仪在 450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪预热，设置好检测程序。 实验完毕后，将未用完的试剂按规定

竞争法ELISA操作步骤

或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。 终止：每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 读值：立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪预热，设置好检测程序。 实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。