噬菌体稀释缓冲液

碘化物缓冲液提取噬菌体单链DNA

碘化物缓冲液： 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA, 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的？我怎么没有提出DNA来，不知道是为什么？用的是NEB手册上写的方法。1. 按上述方法进行噬菌斑扩增，在第一步离心后，将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。2. 加200 µl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置10 min。3. 离心10 min，弃上清液。4. 短暂离心，小心吸去残余上清。5. 沉淀物彻底重悬于100 µl碘化物缓冲液中

ELISA检测筛选到的靶分子结合肽

孔，在密封的湿盒内4℃孵育过夜。每一个克隆包被一列。 （11）倾去靶溶液，并将板子反扣在吸水纸上尽量吸干。在每一个孔中加满封闭缓冲液。另外，每个克隆都需要封闭一列未包被的加样孔，以检测其与BSA包被板子的结合。封闭另一个酶标板用来稀释噬菌体，这样可以保证稀释过程中噬菌体不被靶蛋白吸收。4℃封闭1~2h。 （12）倾去封闭液，用1´TBS/Tween洗涤板子6次，每次都将酶标板反扣在吸水纸上尽量吸干。Tween的浓度应该与筛选洗涤步骤的浓度相同。 （13）用TBS/Tween

Western 实验步骤

梯度（两个孔）取其平均值减去空白后制作标准曲线得到曲线公式。测得的样品的 OD 值（三个孔）取其平均值按标准曲线的公式运算得到蛋白浓度，按 50 μg/上样孔的标准来计算上样量，算法为：上样量= 50/蛋白浓度。注：所有得到的 OD 值必须减去背景（标曲中空白孔的 OD 值）后再计算。 样品处理： 蛋白样品：5×SDS 上样缓冲液按照 4：1 比例混合沸水浴 10 min 左右。浓度过高的样品可用 PBS 稀释后再煮样。样品煮好后 -20 ℃ 保存待用（可保存半年），样品长期保存须置于 -70