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- 2025年07月09日
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- 供应商：
杰美基因
- 库存：
大量
- 规格：
20次
供应试剂主要类别：细胞技术、分子技术、蛋白化学、免疫抗体、医学技术、生物化学、模式生物、微生物、植物、载体、毒理、营养、平台等等相关技术的各种大量试剂。
其中分子技术相关试剂类别如下：
DNA萃取试剂专题
胶回收或PCR产物纯化试剂专题
基因组DNA纯化试剂专题
法医学基因组DNA萃取试剂专题
DNA连接试剂专题
PCR反应试剂专题
RNA纯化试剂专题
RT－PCR试剂专题
RNA分析试剂专题
微型RNA（miRNA）试剂专题
核酸电泳试剂专题
报告基因检测试剂专题
甲基化分析试剂专题
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文献和实验某些标记探针必须经纯化后方可使用。这是因为在探针标记过程中，反应液中仍存在一些未被结合到探针中去的剩余dNTP等小分子。 为将掺入并结合到cDNA，cRNA和标记寡核苷酸与游离的标记寡核苷酸分开，常使用乙醇沉淀法或酚/氯仿抽提法进行纯化。 乙醇沉淀法的原理是：DNA可被乙醇沉淀，而未掺入DNA的dNTP则保留在上清液中，由此反复乙醇沉淀能将两者分开。 核酸溶液中去除蛋白质的酚/氯仿抽提法的原理是：交替使用酚，氯仿这两种不同的蛋白质变性剂，以增加去除蛋白质杂质的效果。
加分作为鼓励，因为有的问题还需要继续讨论！谢谢！第一次做双酶切连接有90％连接成功率（挑了24个克隆），重复性也不错。兴奋之余，相与丁香园各位战友一起分享经验，因为以前得到了许多帮助。准备：目的片段PCR产物胶回收，用乙醇沉淀法纯化胶回收产物，并经紫外分光光度计计算其浓度（A）质粒同样经乙醇沉淀法纯化，测定纯化产物的浓度（B）酶切：目的片断和质粒分别进行双酶切，大约10单位酶能完全切断1μg左右的DNA片断(A/B) 1 μg酶1 0.5 μL酶2 0.5 μL10*通用buffer 2 μL
1、分别设立两个反应，用适当的限制性内切核酸酶消化1－10μg质粒DNA和外源DNA片段，使它们能产生平末端。2、苯酚：氯仿抽提与乙醇沉淀法纯化出已被消化的载体和外源DNA片段。3、分别用TE（pH 8.0）重新溶解纯化出的两种DNA沉淀，使终浓度为100 ng/ml。假设1 bp相当于660Da，计算DNA的终浓度（pmol/ml）。4、将载体DNA去磷酸化。5、按下表将适量的DNA转移至无菌的0.5ml离心管：管号DNAA和E载体1 [60fmol (~100ng)]B外源插入
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