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文献和实验相关专题 蛋白Marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子 量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot 过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量
以λ/Hind III为代表的λDNA酶切片段用作电泳分析中的分子量标准,会发现电泳后分子量条带不对的问题。 解释原因如下:在Lambda DNA分子的左右臂存在着12个碱基组成的具有互补顺序的单链突出端-COS位点,COS位点的退火复性,在λDNA片段电泳分离时会出现问题,含左右臂片段在胶上应出现的地方条带会减弱或完全看不到,而复性的左右臂片段会结合成大的片段,即在较大的分子量区域内产生一个额外的条带,这就造成了不正常的带型。 解决以上问题的办法
1、Marker选择标准(1)应选择在目标片段大小附近ladder较密的marker,这样对目标片段大小的估计较准确。(2)所选marker应能清楚反映目标片段的大小,且次要片段大小也能反映出来。如作酶切鉴定时,目的片段和切后载体片段最好能在同一个marker中反映出来,若二者不能兼顾,将前者作为主要考虑要素。2、常见问题分析Q:为什么marker条带非常模糊,无法辨别具体条带?A:出现上述情况,可能有以下几个原因:1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染;2. 电泳
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