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thermo
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北诺生命科学
公司产品线包括：FastDigest & 常规限制性内切酶、修饰酶、PCR & RT-PCR产品、核酸和蛋白质Markers、分子生物学试剂盒（分子克隆、核酸纯化、标记、检测）、转染试剂、核苷酸等。
Unstained Protein MW Marker, 2 x 1 mL. 26610(SM0431) Pierce
Prestained Protein MW Marker, 500 uL. 26612(SM0441) Pierce
PageRuler Unstained Protein Ladder, 2 x 250 uL. 26614(SM0661) Pierce
PageRuler Prestained Protein Ladder, 2 x 250 uL. 26616(SM0671) Pierce
PageRuler Prestained Protein Ladder, 10 x 250 uL. 26617(SM0672) Pierce
PageRuler Plus Prestained Protein Ladder, 2 x 250 uL. 26619(SM1811) Pierce
PageRuler Plus Prestained Protein Ladder, 10 x 250 uL. 26620(SM1812) Pierce
Spectra Multicolor Broad Range Protein Ladder, 10 x 250 uL. 26623(SM1842) Pierce
Spectra Multicolor High Range Protein Ladder, 2 x 250 uL. 26625(SM1851) Pierce
Spectra Multicolor Low Range Protein Ladder, 250 uL. 26628(SM1861) Pierce
PageRuler Broad Range Unstained Protein Ladder, 26630(SM1881) Pierce
PageRuler Low Range Unstained Protein Ladder, 2 x 250 uL. 26632(SM1891) Pierce
Spectra Multicolor Broad Range Protein Ladder, 2 x 250 uL. 26634(SM1841) Pierce
10X Buffer Cfr9I B02 Fermentas
10X Buffer Cfr10I B04 Fermentas
10X Buffer EcoRI B12 Fermentas
10X Buffer Bsp143I B13 Fermentas
Bovine Serum Albumin B14 Fermentas
10X Taq Buffer with KCl and 15 mM MgCl2 B16 Fermentas
Dilution Buffer for Restriction Enzymes B19 Fermentas
10X Buffer Eco52I B22 Fermentas
10X Buffer SduI, Ppu21I B23 Fermentas
10X Buffer SdaI B24 Fermentas
10X Buffer Eam1105I B25 Fermentas
10X Buffer Ecl136II, PacI, SacI B26 Fermentas
10X Buffer AarI, AjiI, Bpu10I, ScaI, PasI B27 Fermentas
10X Buffer TaqI B28 Fermentas
10X Buffer KpnI B29 Fermentas
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文献和实验PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
时发现，这个实验其实是有扩增的，但原本应该平直的 ROX 荧光曲线却呈现出一个跟 SYBR 颠倒对称的图形（图 12B）。我们查看 Raw data 时发现其第一通道荧光（FAM）是正常上升的，第四通道荧光（ROX）也是维持在正常水平，这就怀疑可能与校准文件异常有关。这台仪器在重新做了 SYBR 荧光校准以后，扩增曲线就恢复正常了，也能得到正常的 CT 值。 图 12 校准文件异常导致曲线异常 关于扩增曲线异常的更多案例分析可以参考我们之前的推文《荧光定量 PCR 异常扩增曲线分析攻略
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