CRISPR/Cas9 敲除载体库（咨询有优惠）

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理

CRISPR/Cas9 gRNA文库筛选功能基因

携带cas9的载体提供。这两种模式载体均携带有额外的抗性筛选标记。 2、gRNA文库扩增 上述构建的载体数量较少，不足以进行文库的慢病毒包装和使用。因此，需要对上述载体进行扩增，增加总量。上述gRNA载体构建完成后，我们将这些载体按相同的比例混合成一个pool（即载体混合库），随后将载体混合库使用专用电转感受态，电转扩增培养并收集菌落，并进行扩大培养，最后抽提质粒，即得到了扩增后的载体混合库，也就是文库。 3、gRNA文库慢病毒包装 扩增后的gRNA文库在慢病毒包装载体的辅助下转染293

CRISPR-Cas9 技术敲除酵母菌 ADE1 基因

选育新方法。而 CRISPR-Cas9 技术的出现，更是极大推动了微生物基因组编辑准确性和效率的提高。【背景】泓迅科技利用 CRISPR-Cas9 技术编辑酵母菌中的一个 920bp 的 ADE1 基因。ADE1 是腺嘌呤合成相关基因，如果 ADE1 失活，则细胞将会积累红色色素，呈现红色菌落。【方法】1、质粒构建2、sgRNA 活性检测3、挑选活性较高的 sgRNA 进行基因组定点编辑4、利用基因功能变化、表性变化和测序等方法检测基因定点修饰结果。【结论】1、从颜色表型变化得知，酵母菌落变成红色菌落，可知 ADE