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CRISPR/Cas9基因点突变载体构建服务

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  • ￥6880
  • 艾迪基因Bingo™平台：高效设计pegRNA与Nick sgRNA，可获高效点突变载体
  • 广州
  • 2025年10月16日
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    广州艾迪基因科技有限责任公司
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    • 提供商：

      艾迪基因

    • 服务名称：

      CRISPR文库筛选定制服务

    • 规格：

      套

    ▍基因点突变载体构建
    基于CRISPR/Cas9基因编辑技术和细胞同源重组修复机制，是目前实现基因点突变最常用的策略。通过gRNA的引导，将Cas9酶引导到目标位点，并通过产生DNA双链断裂，激活细胞的修复机制，通过同源末端连接修复机制，将目标突变引入。然而，这种策略有较多缺点，如编辑效率和纯合概率低，容易导致随机的插入或缺失突变等。

     

    ▍服务详情
    交付标准 1.质粒图谱
    2.质粒测序结果
    3.质粒操作说明
    4.质粒（pegRNA+sgRNA三组），辅助质粒（混合管）
    周期 现货1周（查看现货），定制快至2周 
    价格 6880元起 ；具体可来电咨询18102225074

     

    ▍详情描述
    基于先导编辑PE (Prime Editing)技术，艾迪基因全新研发的Bingo™平台。该平台具备设计高效pegRNA和Nick sgRNA的算法，可获得高效的基因点突变载体。
     
    Prime Editing的技术原理：利用一种融合了逆转录酶的Cas9 nickase（Cas9n-RT）和一种特殊的引导RNA——pegRNA，这种RNA不仅指导编辑酶到达目标DNA序列，还携带了需要插入或替换的遗传信息。在pegRNA的指导下，Cas9n-RT在目标DNA上产生一个单链切口，然后逆转录酶使用pegRNA作为模板合成新的DNA序列，从而实现精准的单碱基替换或小片段的插入和删除，而不需要双链DNA断裂，提高了编辑的精确性和安全性。
     
    ▍服务优势
    产品细节图片1
     
    ▍质粒图谱
    产品细节图片2
    pegRNA质粒图谱
     
    产品细节图片3
    Nick sgRNA质粒图谱
     
    ▍PE现货质粒
    产品细节图片4
     
    ▍ FAQ
    1、如何选择合适的载体类型？
    选择载体时，应考虑实验的目的和宿主细胞的类型。例如，质粒载体常用于细菌中基因的表达或扩增，病毒载体则更适合用于哺乳动物细胞中的基因转导。除此之外，载体的启动子、复制子以及抗生素选择标记也需要根据具体需求进行选择。
     
    2、艾迪基因载体构建的宿主菌是什么？顾客可以使用什么类型菌株来扩增质粒载体？
    载体在进行扩增时，通常会使用大肠杆菌（E. coli）菌株来进行。在实验操作中，常用的大肠杆菌菌株是DH5α。DH5α适用于大多数非重组型载体。对于重组型载体，如慢病毒载体和转座子载体等，可以使用Stbl3菌株进行扩增。Stbl3是一种特殊的大肠杆菌（E. coli）菌株，来源于，HB101 E. coli strain，其基因组含有重组酶recA13突变，这可以有效地抑制长片段末端重复区的重组，从而降低错误重组的概率。
     

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    图标文献和实验
    该产品被引用文献
    ▍参考文献
    1. HEK293T细胞中实现CFTR基因的点突变
    Prime editing functionally corrects cystic fibrosis-causing CFTR mutations in human organoids and airway epithelial cells
    囊性纤维化（Cystic Fibrosis, CF）是一种由跨膜传导调节蛋白（CFTR）双等位基因功能丧失突变引起的常见的遗传性致命疾病。过去已有多种CFTR调节剂疗法获得批准，但这些高效调节剂（HEMTs）只适用于至少有一个F508del等位基因或其他响应性CFTR突变的患者，无法为许多（超）罕见的CFTR突变患者提供治疗方法。随着科学研究发展，人们发现基因治疗能为这些突变提供了新的治疗机会。特别是最近开发的基于CRISPR的系统——prime editing（PE），为治疗遗传性疾病开辟了新的时代。Prime editing能够在患者的染色体上原位“重写”和纠正突变，提供了治疗单基因疾病如CF的新机会。
    在这篇文章中，研究人员利用CRISPR-Cas9技术设计了针对CFTR基因中L227R和N1303K两种突变的prime editing策略，并在HEK293T细胞中构建了稳定表达3HA-L227R-CFTR和3HA-N1303K-CFTR的细胞模型来评估prime editing的效果。在开发的DETECTOR机器学习算法保证效率和准确率的情况下，研究人员进一步进行基因和功能校正的评估，结果显示编辑效率最高可达25%，纠正后的CFTR蛋白在糖基化、定位和离子通道功能方面得到了显著恢复。这些结果也在原代细胞模型试验中得到验证。此外，利用全基因组评估分析，研究员们并未发现显著的脱靶编辑事件，证明了prime editing的高保真度，并且该研究的临床相关性与安全性评估也得到通过。总的来说，这项研究展示了prime editing技术在纠正CFTR基因突变和恢复CFTR蛋白功能方面的潜力，为囊性纤维化的治疗提供了新的思路和方法。
     
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    • 诺奖得主 Science 发文：基因编辑诞生 10 年，未来将如何改变世界？

      。 特定碱基位点的编辑修改 点突变是人类致病性遗传变异的最大类别，特定于位点的编辑修改拓宽了研究基因点突变的能力，并且可以通过纠正点突变来治疗遗传性疾病。此外，碱基编辑可以在有丝分裂和无丝分裂细胞中引入修饰。 CRISPR 碱基编辑器通常由 Cas9 切口酶（nCas9）和催化核碱基脱氨反应的酶融合组成。sgRNA 将 nCas9-脱氨酶融合引导至基因组靶标，形成三元复合物，将 ssDNA 区域暴露于脱氨酶以进行化学修饰，由此产生的碱基错配随后通过细胞修复机制解决。在过去的几年中，DNA

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