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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温,避光
- 保质期:
6个月
- 库存:
大量
- 供应商:
上海沪震
所需设备:所需设备:721、722型可分光光度计、酶标仪、96孔酶标板。工作波长550 nm。
SDS-PAGE 电泳液产品优点:
1、线性范围:0-500U/L(判定依据:r2≥0.995);
2、准确度:不准确度≤10%;
3、精密度:批内CV<4.0%;批间相对极差<6.0%;
4、灵敏度:试剂检测下限≤4.0U/L。
SDS-PAGE 电泳液样品收集、处理及保存
细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。
细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。
血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。
体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。
组织标本:切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。
样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
SDS-PAGE 电泳液相关产品如下:
hzF115885 BOC-L-2-氟苯丙氨酸, 98%
hzF115940 FMOC-L-Β-同型亮氨酸, 96%
hzF116765 N-Fmoc-N'-三苯-L-组氨酸五氟苯基酯, 75%
hzF116766 Fmoc-D-丙氨酸 , 98%
hzF116768 Fmoc-Arg(Mtr)-OH, 98%
hzF116771 Nα-Fmoc-Nω-甲苯磺酰基-L-精氨酸, 98%
hzF116772 Fmoc-D-天冬酰胺, 98%
hzF116773 Fmoc-L-天冬氨酸 alpha-烯丙酯, 97%
hzF116774 Fmoc-L-天冬氨酸 beta-叔丁酯, 98%
hzF116776 芴甲氧羰基-S-乙酰氨-L-半胱氨酸, 98%
hzF116778 Fmoc-S-叔丁基-L-半胱氨酸, 98%
hzF116779 Fmoc-L-谷氨酸γ苄脂, ≥98.0% (HPLC)
hzF116780 N-芴甲氧羰基-D-谷氨酸 gamma-叔丁酯, 98%
hzF116782 N-Fmoc-N'-三苯-L-组氨酸, 98%
hzF116787 Fmoc-D-异亮氨酸, 98.5%
hzF116788 Fmoc-D-亮氨酸, 98%
hzF116791 Fmoc-N'-三氟乙酰基-L-赖氨酸, 96%
hzF116793 Fmoc-D-脯氨酸, 98%
hzF116796 Fmoc-O-叔丁基-D-丝氨酸, 98%
hzF116797 Fmoc-O-苄基-L-丝氨酸, 98%
hzF116798 FMOC-O-叔丁基-L-丝氨酸 , 98%
hzF116799 Fmoc-O-三苯-L-丝氨酸, 98%
hzF116801 Fmoc-L-色氨酸(Boc)-OH, 97.0%
hzF116802 Fmoc-L-酪氨酸, 97%
hzF116803 Fmoc-O-苄基-L-酪氨酸, 98%
hzF116804 Fmoc-O-叔丁基-L-酪氨酸, 98%
hzF116805 Fmoc-O-叔丁基-D-酪氨酸, 99%
hzF116807 Fmoc-D-缬氨酸, 98%
hzF116808 FMOC-L-丙氨酸五氟苯酯, 96%
hzF116809 Fmoc-D-Ala-OPfp, 98%
hzF116811 N'-(4-甲氧基-2,3,6-三苯磺酰基)-D-精氨酸, 98%
hzF116812 Fmoc-Arg(Mts)-OH, 96%
hzF116815 Fmoc-Asn-OPfp, 98.5%
hzF116816 L-天门冬二氨酸, 98%
hzF116843 Fmoc-Pro-OPfp, 96%
hzF116844 Fmoc-丝氨酸磷酸苄酯, ≥97.0% (HPLC)
hzF116845 Fmoc-Ser(tBu)-OPfp, 98%
hzF116846 芴甲氧羰基-O-苄基-L-苏氨酸, 98%
hzF116847 Fmoc-苏氨酸磷酸苄酯, 98%
hzF116848 Fmoc-Thr(tBu)-OPfp, 98%
hzF116849 芴甲氧羰基-O-叔丁基-D-苏氨酸, 98%
hzF116850 Fmoc-Trp-OPfp, 98.0%
hzF116853 Fmoc-Tyr(tBu)-OPfp, 98.5%
hzF116854 Fmoc-O-磷酸基-L-酪氨酸, 98%
hzF116855 Fmoc-Tyr(PO3Bzl2)-OH, 98.5%
hzF116856 Fmoc-Val-OPfp, 98.0%
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文献和实验的 SDS-PAGE 的相关知识。(PS:附带一张简单明了的 DNA 印迹、RNA 印迹及蛋白质印迹流程图~~)一、配胶、制胶首先 SDS(十二烷基硫酸钠,一种阴离子洗涤剂)能使蛋白变性,并使所有蛋白质颗粒表面覆盖一层 SDS→使蛋白均匀地带上负电荷→从而使质量相似但形状或电荷不同的蛋白在电泳液中能以相似的速度进行迁移→→因此 SDS 被加到凝胶溶液、蛋白样品和电泳液中,以确保蛋白在整个过程都展开并保持负电荷。其实所谓的凝胶,其本质是聚丙烯酰胺。过程中,多格聚丙烯酰胺分子相互交联,最后形成一个蛋白
SDS-PAGE Western Blotting Protocols
). Part II – SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis 1. For each SDS-PAGE gel, sandwich one small and one large glass plate,separated by spacers (smeared with silicone lubricant) and an alignment card. Optional: The inside surface of the small
1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起
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