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明胶

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  • 2025年07月14日
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      上海沪震

    基础明胶
    绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足。例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应。
    明胶 制备方法:
    1. 培养同源细胞(未克隆前时的同一细胞)至半汇合状态时,更换一次培养液,再继续培养24~48小时后,吸出所有培养液。
    2. 离心:3000~4000/分离心10分钟,吸取上清液。
    3. 滤过:再经直径0.22μm滤孔的滤膜过滤,低温冻存贮备用;用时取1分适应培养基+2培养基混合使用。
    生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求,若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分,将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡。解决这一问题有两条思路,一是让培养细胞提供自己的营养因子,二是在明胶 中加入纯的生长因子。如果细胞混合物能在高密度时生长,所需的生长因子便会积累到可观的数值,尤其当培养基很少变化时。若某种细胞混合物生长时有很少的营养需求,可保持培养基在一段时间里不作任何变动,以使营养(生长)因子积累,而最后促使所需要的细胞类型能够生长。但是,这种对营养(生长)因子自身倚赖性亦有弊端,因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖,某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制。另外,这种方法只能进行相当高密度的细胞培养。因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效。不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基(经过了高密度培养)进行,或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持。
    满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子。通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF。不过,只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长。
    明胶 注意事项
    1 用L-多聚赖氨酸(0.1mg/ml) 包被培养板后,要待其干后才能接种,因为其对神经元有毒性。L-多聚赖氨酸(0.1mg/ml)能回收再利用。
    2 取脑组织时动作尽量要快,并且尽量低温操作。
    3 分离皮层和海马时,要尽量分离脑膜和血管,否则有大量的成纤维细胞。
    4 用吸管轻轻吹打细胞时,尽量不起泡沫,以免损伤神经元。
    5 接种细胞的过程,动作要快,以免细胞聚集。
    6 接种细胞后,24h勿移动,以免影响细胞贴壁。
    明胶 相关产品如下:
    hz5001 蛋白胨水(色氨酸肉汤) 20支
    hz5002 7%NaCl胰胨水 20支
    hz5003 10%NaCl胰胨水 20支
    hz5004 3.5%NaCl乳糖 20支
    hz5005 3.5%NaCl阿拉伯糖 20支
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    hz5007 3.5%NaCl甘露醇 20支
    hz5008 3.5%NaCl葡萄糖磷酸盐胨水 20支
    hz5009 3.5%NaCl氨基酸脱羧酶对照 20支
    hz5010 3.5%NaCl鸟氨酸脱羧酶 20支
    hz5011 3.5%NaCl精氨酸脱羧酶 20支
    hz5012 3.5%NaCl赖氨酸脱羧酶 20支
    hz5013 无盐胰胨水 20支
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    hz5022 3%NaCl V-P半固体 20支
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    hz5024 3%NaCl赖氨酸脱羧酶 20支
    hz5025 3%NaCl鸟氨酸脱羧酶 20支
    hz5026 3%氯化钠尿素酶 20支 用于副溶血性弧菌的生化鉴定
    hz5027 3%氯化钠麦芽糖 20支 用于副溶血性弧菌的生化鉴定
    hz5028 3%氯化钠甘露醇 20支 用于副溶血性弧菌的生化鉴定
    hz5029 3%氯化钠硫化氢 20支 用于副溶血性弧菌的生化鉴定
    hz5030 3%氯化钠硝酸盐肉汤 20支 用于副溶血性弧菌的生化鉴定
    hz5031 实验生化管 20支 用于沙门氏菌的生化试验
    hz5032 革兰氏染色液 5ml*8 用于细菌革兰氏染色试验
    hz5033 山梨醇麦康凯琼脂添加剂 1ml*5 每200mlHB0121培养基中添加1支(含头孢克肟0.01mg和亚碲酸钾0.5mg)
    hz5034 4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷(MUG) 0.1g 0.01g添加于100mlHB0146(LST-MUG)中,用于O157鉴定
    hz5035 酚红葡萄糖肉汤 20支
    hz5036 改良山梨醇麦康凯琼脂添加剂 1ml*5支 每支添加于200ml HB0121-3中
    hz5037 改良麦康凯肉汤添加剂 1ml*5支 每支添加于200mlHB8659中
    hz5038 Korser氏肉汤 20支
    hz5039 硝酸盐肉汤(还原) 20支
    hz5040 硝酸盐肉汤 20支
    hz5041 V-P半固体琼脂 20支
    hz5042 葡萄糖半固体 20支
    hz5043 1%NaCl蔗糖 20支
    hz5044 1%NaCl乳糖 20支
    hz5045 鼠李糖发酵管 20支
    hz5046 木糖发酵管 20支

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    相关实验
    • 明胶

      一、明胶铺被 1、问;我曾经常识过高压与过滤两种方法。其中高压之后的明胶,即使放4℃冰箱仍很澄清,这是不是明胶变性?你觉得高压可靠吗?明胶里是蛋白与氨基酸能耐住这么高的温度吗?另外,明胶在37℃水浴溶解澄清后,过滤仍不易通过(每50ml大约可滤到30ml),而且过滤后的明胶再放到4℃就又变为胶冻状,经37℃水浴澄清后铺瓶。这样反复三次,发现我的明胶有些浑浊,不知什么原因,是不是这样的反复水浴对明胶十分的不利? 答:不用过滤,高压就可以了,可靠,我都用了好几年了,而且,我这个方法教给很多

    • 明胶培养基

      成份:肉浸液 1000毫升(牛肉浸膏5克) 明胶 12克 制法:100毫升肉浸液中,加入明胶12克,隔水加热煮化,校正PH7.2,分装小号试管,用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟,连续3日,或者108℃高压20分钟,冷却,贮存备用。  

    • 营养明胶

      成分:   蛋白胨     5g   牛肉膏     3g   明胶      120g   蒸馏水     1000mL   pH6.8~7.0 制法:加热溶解、校正至pH7.4~7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固。复查最终pH应为6.8~7.0。 试验

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