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刘荣标氏鞭毛染色液

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  • 2025年07月10日
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      上海沪震

    基础刘荣标氏鞭毛染色液
    绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足。例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应。
    刘荣标氏鞭毛染色液 制备方法:
    1. 培养同源细胞(未克隆前时的同一细胞)至半汇合状态时,更换一次培养液,再继续培养24~48小时后,吸出所有培养液。
    2. 离心:3000~4000/分离心10分钟,吸取上清液。
    3. 滤过:再经直径0.22μm滤孔的滤膜过滤,低温冻存贮备用;用时取1分适应培养基+2培养基混合使用。
    生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求,若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分,将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡。解决这一问题有两条思路,一是让培养细胞提供自己的营养因子,二是在刘荣标氏鞭毛染色液 中加入纯的生长因子。如果细胞混合物能在高密度时生长,所需的生长因子便会积累到可观的数值,尤其当培养基很少变化时。若某种细胞混合物生长时有很少的营养需求,可保持培养基在一段时间里不作任何变动,以使营养(生长)因子积累,而最后促使所需要的细胞类型能够生长。但是,这种对营养(生长)因子自身倚赖性亦有弊端,因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖,某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制。另外,这种方法只能进行相当高密度的细胞培养。因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效。不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基(经过了高密度培养)进行,或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持。
    满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子。通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF。不过,只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长。
    刘荣标氏鞭毛染色液 注意事项
    1 用L-多聚赖氨酸(0.1mg/ml) 包被培养板后,要待其干后才能接种,因为其对神经元有毒性。L-多聚赖氨酸(0.1mg/ml)能回收再利用。
    2 取脑组织时动作尽量要快,并且尽量低温操作。
    3 分离皮层和海马时,要尽量分离脑膜和血管,否则有大量的成纤维细胞。
    4 用吸管轻轻吹打细胞时,尽量不起泡沫,以免损伤神经元。
    5 接种细胞的过程,动作要快,以免细胞聚集。
    6 接种细胞后,24h勿移动,以免影响细胞贴壁。
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    • 细菌鞭毛染色方法及其应用

      平板,26℃培养24h。试剂配方仍不变,媒染液放置1、2、4、8、16周后进行染色,媒染液染色8 min,银染液染色30~60 s,不需加热。这4种细菌均染色成功,从而证明媒染液可至少放置16周。   2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。该法将媒染剂分为A、B两种。A为酸化FeCl3溶液,B为15%单宁酸,含甲醛1 ml,用时A、B等量混合,轻微加热,染片40s,再用银染液涂片加热至微冒蒸汽,染色10 s。通过对19个属,34个种,228株细菌进行鞭毛染色

    • 细菌形态检查法

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    • 微生物常用染色液的配制

      %甲醛)0.5 ml 将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟,然后加入福尔马林作防腐剂。 2. 番红染液 与革兰氏染液中番红复染液相同。 六、鞭毛染色液 A:单宁酸5 g FeCl3 1.5 g 蒸馏水 100 ml 福尔马林(15%)2.0 ml NaOH(1%)1.0 ml 配好后,当日使用,次日效果差,第三日则不宜使用。 B:AgNO3 2 g 蒸馏水 100 ml 待AgNO3溶解后,取出10 ml 备用,向其余的90 ml AgNO3中

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