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DNA-OFF
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500ml
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文献和实验FDA、SFDA对重组蛋白、vero细胞疫苗等生物制品的DNA残留均有严格要求,近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题,引起了社会和业界的广泛关注。为什么一个看似简单的问题,却给众多专业人员带来如此大的困扰?一方面是由于DNA超强的化学稳定性,另一方面是由于DNA其带有大量的电荷易与其他生物大分子结合从而产生聚集(吸附)、包裹作用而难以完全除去。DNA的去除方法主要有层析、膜过滤、离心、沉淀、酶解等方法。这里对工业上应该最广泛和有效的离子交换层析、鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法进行
体污染不除,实验结果势必或多或少产生偏差,故进行实验前,确定细胞为mycoplasma-free至关重要,实验结果之数据才有意义。 支原体污染一般来源于血清,实验仪器、培养基或其他试剂蔓延开来。怎样预防和去除支原体污染呢?一般只有三种抗生素(四环素,大环内脂和喹诺酮)能有效对付支原体。在低浓度时,这些抗生素不会产生耐药性,且对哺乳动物细胞的毒性较小。四环素和大环内酯能结合30S和50S核糖体亚基,从而抑制蛋白质合成,喹诺酮抑制DNA旋转酶。因此可以在细菌DNA复制及蛋白质合成两个层面上抑制
,但切断特定部位;II类酶切断识别部位或其附近的特定部位,酶切后的双链DNA的末端是粘性末端,某些限制酶产生平末端。因此,应用于基因工程研究用的限制酶,一般全是II类酶,现在市场上销售的酶都属于II类酶。 二、实验 试剂 DNA样品(基因组和胆盐水解酶基因连接T载体的重组质粒), 限制性内切酶 ,酶切缓冲液(购酶时附),无菌双蒸水。 ask.bbioo.com
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